Resumo |
Nas últimas décadas, houve um crescente interesse científico no desenvolvimento de biopolímeros. Dentre eles, a celulose bacteriana (CB) – um polímero de β-D-glicopiranoses unidas por ligações glicosídicas β (1-4) – apresenta composição química similar à celulose vegetal com alto índice de cristalinidade, polimerização e pureza. Para além das propriedades físicas e químicas que justificam o interesse na produção industrial de CB, o desenvolvimento de processos que utilizem meios de cultivo alternativos para a redução do custo do produto final se faz necessário. O objetivo do presente trabalho foi isolar bactérias de SCOBY de kombucha produtoras de celulose e adaptadas ao crescimento em meio de cultivo líquido (MCL) obtido a partir da casca e do epicarpo-mesocarpo de laranja (Citrus sinensis). Para obtenção do MCL, foi realizado um tratamento que incluiu trituração da casca+epicarpo-mesocarpo em água (proporção 1:2 - 2,5 min em multiprocessador), seguida de autoclavação (121 °C por 15 min), filtração (coador de voal) e centrifugação (11,739 x g, por 10 min). Porções de 0,5 a 1 grama da amostra de SCOBY K30 da Coleção do Laboratório FERMICRO (UFV) foram cultivadas em béqueres de 50 mL contendo 25 mL de MCL (5,0 °Brix e pH 4,7). Após 7 dias de incubação estática a 25 °C, um fragmento do novo SCOBY (0,5-1,0 g) produzido foi agitado por 3 min em tubos tipo falcon de 15 mL contendo 3 mL de salina (0,1%) peptonada (1%) e 15 unidades de beads de vidro (1,0 mm) por 10 min. A suspensão microbiana obtida foi, então, utilizada para a realização de diluições decimais seriadas (10E-1 a 10E-5) em salina peptonada e 0,1 mL de cada diluição foi plaqueado em ágar GY (ágar, 2%; glicose, 2%; e extrato de levedura, 1,0%) por meio de inoculação em superfície (spread plate). Após incubação a 30 °C por 3-5 dias, cerca de 14 colônias isoladas do plaqueamento das últimas diluições foram transferidas para 0,5 mL de caldo GY em microtubos Eppendorf, que foram, então, incubados sob as mesmas condições. As bactérias cultivadas nos caldos foram semeadas em placas de Petri contendo ágar GY para aumento da biomassa. Os isolados obtidos foram avaliados para verificar a capacidade de formação de SCOBY em MCL. Para isso, uma alçada das colônias foi transferida para béqueres de 25 mL contendo 15 mL de MCL para cultivo estático a 25-30 °C. Além dos isolados citados, outras três bactérias isoladas de kombucha, pertencentes à coleção de isolados microbianos obtidos de kombuchas brasileiras do laboratório, também foram avaliadas para a produção de CB. A partir da triagem realizada, foi observada a formação de películas de celulose apenas para os cultivos das bactérias AK18.3.9 e AK18.3.10, demonstrando a capacidade produtora de CB de tais isolados em meio de cultivo alternativo de resíduo de laranja (casca+epicarpo-mesocarpo). |