Resumo |
Introdução: O soro do leite contém uma mistura de proteínas com diferentes propriedades funcionais de diversificado potencial de aplicação. Em particular, a lactoferrina (Lf) se destaca pelas propriedades antibacteriana, antiviral, anticarcinogênica, dentre outras. A albumina do soro bovina (BSA) além de ser uma proteína modelo, utilizada como padrão em diferentes áreas de pesquisa, apresenta semelhança estrutural e funcional com a albumina de soro humano, possibilitando diferentes aplicações biotecnológicas. Diferentes tecnologias de separação podem ser usadas para concentrar, isolar e purificar a Lf e BSA do soro, no entanto, essas técnicas apresentam custos elevados, abrindo espaço para o desenvolvimento de processos alternativos e de baixo custo. Dentre as técnicas descritas na literatura, a adsorção em hidroxiapatita (HA) tem grande potencial na separação das proteínas do soro de leite. A HA é um fosfato de cálcio, da família das apatitas, possui estequiometria bem definida, Ca10(PO4)6(OH)2 e a melhor estabilidade termodinâmica de sua família. É uma das biocerâmicas mais utilizadas para reconstrução óssea e dentária. Objetivo: Avaliar o efeito de diferentes características morfológicas e cristalográficas no fenômeno de adsorção entre proteínas ácidas e básicas do soro do leite e HAs sintetizadas. Material e métodos: As HAs foram sintetizadas usando uma rota de precipitação úmida descrita por Tiselius e adaptada por Rossano, resultando em quatro tratamentos diferentes: (i) HA0, sem tratamento térmico; (ii) HAS5, sinterizada a 500 ℃; (iii) sinterizada a 700 ℃; e (iv) sinterizada a 1000 ℃. As HAs sintetizadas foram caracterizadas por diferentes métodos analíticos. Para cada um dos 4 tratamentos de HA, foram preparados 60 tubos eppendorfs de 2,0 mL contendo 0,04g de HA, 12 tubos para cada um dos pHs testados (5,0; 6,5; 7,5; 9,0 e 10,5). As soluções de Lf e BSA preparadas para adsorção foram de 5 mg/mL. O processo de adsorção foi de 360 minutos de agitação em temperatura de 25 ºC, feita por uma bomba peristáltica adaptada a velocidade de 30 rpm. A determinação da capacidade de adsorção foi feita por balanço de massa, através da determinação da quantidade de BSA e lactoferrina adsorvida (UV-VIS) pelo método de leitura direta. Resultados e conclusões: Os resultados mostram forte influência do pH na eficiência de adsorção. O pH 5,0 foi o valor em que as HAs adsorveram a maior quantidade de Lf. A baixa capacidade de adsorção em pH 9,0 pode ser explicada pela proximidade do valor de pI de Lf (8,7). Para BSA. Os resultados mostram a diminuição da capacidade de adsorção em função do aumento do pH, portanto o valor de pH que apresenta a melhor capacidade de adsorção também é pH 5,0 para todos os tratamentos. O BSA tem a maior capacidade de adsorção perto de seu pI, (pH 5,0) enquanto Lf apresenta o oposto. |