Resumo |
A soja é um dos principais produtos agrícolas do mundo, com fundamental importância para a economia brasileira. Sua produtividade é limitada pela presença de pragas como a lagarta-da-soja (Anticarsia gemmatalis). Considerada um dos principais problemas dessa cultura, a A. gemmatalis é um inseto que causa grandes prejuízos devido à severa herbivoria durante sua fase larval. A fim de controlar essa interação planta-praga, os inibidores de protease têm se mostrado importantes estratégias no controle de insetos que causam danos à lavoura. Portanto, compreender este complexo sistema inibidor/protease é importante para o controle de pragas. Assim, o objetivo deste trabalho foi identificar as proteases presentes no intestino da A. gemmatalis, responsáveis por sua digestibilidade. Para isso, intestinos de lagartas do quinto instar foram dissecados e o extrato enzimático extraído. Esse extrato foi submetido a um zimograma, utilizando colágeno como substrato copolimerizado à malha do gel. As bandas correspondentes a atividades proteolíticas foram excisadas, tripsinizadas e os peptídeos analisados por espectrometria de massas em um sistema LC/MS. Os resultados foram confrontados com banco de dados de Bombyx mori para a identificação das proteínas homólogas e apenas os peptídeos identificados com, pelo menos, dois peptídeos únicos e maiores scores foram considerados. Por meio dessa estratégia, após a filtragem de dados e retirada de redundâncias, identificamos 19 proteases. Dentre as proteases identificadas, 14 corresponderam à sub-subclasse das serino proteases, como tripsina e quimotripsina, que representam as enzimas com maior relevância digestiva da fase larval dessa espécie e, portanto, moléculas alvo no desenvolvimento de inibidores de proteases. Além disso, proteínas de reserva, estruturais e sinalizadoras também foram identificadas. Os resultados encontrados permitem que estudos estruturais de interação entre enzima e inibidor sejam realizados. Isso representa um importante avanço no desenvolvimento de pesquisas que visam o desenvolvimento racional de inibidores de proteases como uma alternativa eficiente e ecológica de manejo de insetos praga. |