"Ciências Básicas para o Desenvolvimento Sustentável"
24 a 26 de outubro de 2023
Trabalho 19903
| ISSN | 2237-9045 |
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| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Agrárias |
| Área temática | Bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG, Outros |
| Primeiro autor | Kausely Ayane Almeida Andrade Mendes |
| Orientador | MARIA CRISTINA BARACAT PEREIRA |
| Outros membros | Beatriz Lovisi Costa |
| Título | Perfil proteico, potencial antimicrobianos e toxicidade de peptídeos básicos de glicinina-like de sementes de girassol para desenvolver fitodefensivos |
| Resumo | A resistência microbiana aos agentes de defesa agrícola ou fármacos disponíveis é uma grave ameaça à saúde pública. Peptídeos básicos de glicina (GBPs), caracterizados como peptídeos antimicrobianos (AMPs), são opções potenciais para o controle de doenças e resistência aos microrganismos, com mecanismos de ação diferentes dos antimicrobianos convencionais. Apresentarem espectro de ação amplo ou restrito, e possuem em geral rápida ação com baixa citotoxicidade para homens e animais. O genoma de girassol (Helianthus annuus) possui proteínas de reserva glicininas-like, sendo fontes simples e de farta quantidade de proteínas funcionais e de baixo custo para preparar agentes de defesa. Com o objetivo de gerar defensivos de inovação, sementes de girassol foram germinadas, extratos foram preparados e o potencial antimicrobiano contra microrganismos patogênicos e sua toxicidade teórica foram avaliados. Sementes de girassol foram germinadas por 48 e 72h em temperatura ambiente e armazenados a -80°C até o uso. Para preparar os extratos, foram maceradas na proporção 1:10 (10 mL de solução por grama de semente macerada) com Tris-HCl 50 mM, pH 6,8, e na presença de EDTA 10mM, PMSF 1mM, benzamidina 1mM e tioureia 2mM. O extrato foi centrifugado a 20.100 x g por 30 minutos a 4 °C. Ao sobrenadante foi adicionado solução de acetona gelada contendo TCA 10% (v/v) e DTT 1 mM na proporção de 1:6 em volume, permanecendo overnight em um freezer a -20 °C. Cada amostra foi, em seguida, centrifugada a 20.100 x g por 30 min a 4 °C e o sobrenadante foi descartado. Os pellets foram lavados com acetona gelada e DTT 1 mM na proporção de 1:6 e centrifugado novamente a 20.100 x g por 30 min a 4 °C, procedimento que repetiu-se 4 vezes. Após, o pellet formado foi ressuspendido em etanol 80% (v/v) contendo DTT 1 mM na proporção de 1:6, centrifugado a 20.100 x g por 30 min a 4 °C, o sobrenadante foi descartado e o pellet foi seco em temperatura ambiente. Este pellet, contendo as proteínas das sementes de girassol, foi ressolubilizado em solução de Tris- HCl 25 mM e purificado por ultrafiltração em membrana de 30 kDa e 10 kDa. As frações obtidas, menor que 10kDa e entre 30kDa e 10kDa foram concentradas em speed-vac e utilizadas amostras em diferentes concentrações (1x, 5x e 10x) para avaliar o potencial antimicrobiano. Foram realizados testes antimicrobianos em bactérias Escherichia coli e Staphylococcus aureus e em leveduras, Rhodotorula mucilaginosa e Saccharomyces pastorianus, com inibição parcial dos microrganismos avaliados. Novos ensaios estão sendo desenvolvidos. Apoio: CNPq, FAPEMIG, CAPES, FINEP, BIOAGRO e NUBIOMOL. |
| Palavras-chave | Peptídeos antimicrobianos, peptídeos básicos de glicina (GBP), GBP-like. |
| Forma de apresentação..... | Painel |
| Link para apresentação | Painel |
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