"Ciências Básicas para o Desenvolvimento Sustentável"
24 a 26 de outubro de 2023
Trabalho 19869
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | PIBITI/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Nathália Gisele Alves Ribeiro |
| Orientador | ELIZABETH PACHECO BATISTA FONTES |
| Outros membros | PEDRO AUGUSTO BRAGA DOS REIS |
| Título | Manipulação de genes para resistência contra begomovírus |
| Resumo | As plantas, como organismos sésseis, desenvolveram ao longo do tempo diversos mecanismos de resistência, alguns especializados na defesa contra agentes patogênicos e outros funcionando como barreiras contra fatores abióticos. A proteína LIMYB (L10-interacting myb domain-containing protein - LIMYB) que possui um domínio Myb representa um exemplo de proteínas que respondem tanto a estresses bióticos como abióticos. A família de proteínas MYB possui uma distribuição diversa entre os grupos de plantas e está muito bem caracterizada em Arabdopsis thaliana. Estudos anteriores mostraram que LIMYB participa de uma importante via de resistência a begomovírus, vírus que infecta plantas. Como um repressor de transcrição, LIMYB é ativado como resultado da ativação da proteína NIK1 (nuclear shuttle protein-interacting kinase). Após a percepção de um estímulo viral na superfície da célula, a proteína NIK1 é ativada e inicia uma cascata de sinalização que leva à fosforilação da proteína ribossomal L10, que é translocada para o núcleo, onde interage com LIMYB para reprimir a expressão de genes da maquinaria de tradução. Esta reprogramação da expressão gênica mediada por LIMYB resulta em supressão da tradução global na célula vegetal, impedindo a tradução de proteínas virais e o progresso da infecção. Sabendo que uma característica importante das proteínas com domínio MYB é a capacidade de se ligar ao DNA, o que as torna importantes fatores de regulação, a proteína LIMYB foi purificada a fim de analisar suas possíveis interações. Para isso, o clone pUFV1834, cDNA da proteína LIMYB inserido no vetor pDEST-17, foi usado para transformar células competentes de E. coli, estirpe Rosetta (DE3). As colônias transformadas foram inoculadas em 5 mL de meio LB líquido com antibióticos de resistência (ampicilina e cloranfenicol). Após atingir OD 0,8, os inóculos foram tratados com IPTG (Isopropil β-D-1-tiogalactopiranosídeo) 0,8 mM overnight a 30°C. As proteínas induzidas foram purificadas utilizando o protocolo de purificação His-Tag em condições não desnaturantes, sendo separadas nas três frações: total, insolúvel e solúvel, as quais foram separadas por eletroforese em géis de poliacrilamida. A presença da proteína foi confirmada por Western Blot com anticorpos específicos para LIMYB. A proteína purificada será usada para interações de ligação ao DNA a partir de ensaios eletroforéticos de mudança de mobilidade (EMSA). Elucidar o mecanismo de ação, da proteína de defesa LIMYB em Arabdopsis thaliana pode tornar possível a expansão e aplicação desse conhecimento em outros gêneros e espécies de plantas cultiváveis para resistência contra begomovírus. |
| Palavras-chave | LIMYB, begomovírus, NIK1 |
| Forma de apresentação..... | Painel |
| Link para apresentação | Painel |
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