"Ciências Básicas para o Desenvolvimento Sustentável"

24 a 26 de outubro de 2023

Trabalho 19812

ISSN 2237-9045
Instituição Universidade Federal de Viçosa
Nível Graduação
Modalidade Pesquisa
Área de conhecimento Ciências Biológicas e da Saúde
Área temática Imunologia
Setor Departamento de Biologia Geral
Bolsa FAPEMIG
Conclusão de bolsa Sim
Apoio financeiro FAPEMIG
Primeiro autor Maria Regina Fonseca Ramos
Orientador SERGIO OLIVEIRA DE PAULA
Outros membros Fabiana Martins Costa Fontes, John Willians Oliveira Prates, Luciana de Souza Fernandes, Roberto Sousa Dias
Título Produção de kit diagnóstico baseado em vesículas de polidiacetileno para detecção de anticorpos contra o SARS-CoV-2
Resumo A pandemia de COVID-19 deixou recentemente de ser uma Emergência de Saúde Pública de Importância Internacional. No entanto, mais de 690 milhões de pessoas foram infectadas até o momento, resultando em mais de 6 milhões de mortes no mundo e mais de 700 mil só no Brasil. A resposta contra a doença demandou mobilização global da comunidade científica para o desenvolvimento de métodos diagnósticos, terapêuticos e profiláticos em tempo recorde, o que somente foi possível devido à presença de plataformas bem estabelecidas. Nesse contexto, este projeto objetivou a produção de vesículas a partir do polidiacetileno (PDA) para a elaboração de kits diagnósticos. Essas vesículas têm como propriedade a mudança da coloração, do azul para o vermelho, bem como do espectro de absorção máximo, mediante estímulos externos. Assim, para fins diagnósticos, a vesícula é funcionalizada com o objetivo de que, a partir de uma interação de alta afinidade, a transição colorimétrica indique a presença de determinada molécula de interesse. Neste trabalho, foram produzidas vesículas contendo a proteína S do SARS-CoV-2 (expressão heteróloga através de Komagataella phaffii) e, portanto, a interação antígeno-anticorpo é a responsável pela mudança cromática. Para tal, foram diluídos 3,7 mg de ácido pentacosadiinócio (PCDA) e 3,4 mg de dimiristoifosfatidilcolina (DMPC) em 10 e 5 mL de clorofórmio, respectivamente. Em seguida, as soluções foram misturadas na proporção 7:3 (PCDA/ DMPC) até o volume final de 10 mL, o qual foi submetido ao fluxo de nitrogênio até completa secagem. Logo após, 10 mL de água ultrapura foram adicionados ao residual, que foi submetido ao banho ultrassônico e, então, sonicado por 10 minutos a 80 W. Posteriormente, 3,3 mg de EDC-HCl e 3,5 mg de N-hidroxisuccinamida (NHS) foram adicionados para interação por 1 h. Em seguida, foi acrescida a proteína na concentração final de 33 µg/mL e incubado por 5 h. A fim de evitar possíveis interações inespecíficas, albumina bovina (BSA) 1% foi utilizada para bloqueio. Todas as incubações ocorreram em agitação a 4°C. Ao final do processo, a amostra foi polimerizada em banho ultravioleta por 15 min. A avaliação da funcionalidade das vesículas foi realizada através de soros de pacientes previamente infectados com a COVID-19, detentores de anticorpos contra o vírus. O controle foi feito com sorologia negativa. Os resultados demonstraram a efetividade do método para a distinção de pacientes sorologicamente positivos de negativos. A mudança na coloração da amostra foi observada visual e espectrofotometricamente, em dois comprimentos de onda. Pela curva ROC foi possível determinar um cutoff de 0,0045 nm para discriminação dos resultados, com 91,67% de sensibilidade e especificidade. A eficácia da técnica, portanto, impõe como perspectiva a consolidação de um novo teste, rápido e preciso, para a COVID-19 e outras doenças virais.
Palavras-chave Sensor, polidiacetileno, point of care
Forma de apresentação..... Painel
Link para apresentação Painel
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