"Ciências Básicas para o Desenvolvimento Sustentável"
24 a 26 de outubro de 2023
Trabalho 19440
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Ensino médio |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | BIC-Júnior |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | Outros |
| Primeiro autor | Carlos Daniel Oliveira Silva |
| Orientador | TIAGO ANTONIO DE OLIVEIRA MENDES |
| Outros membros | Luiza de Oliveira Possa, Renato Lima Senra, Vinicius dos Santos Romagnoli, Wyver Moreira Goncalves |
| Título | Desenvolvimento de antígeno vacinal contra Brachyspira spp. por vacinologia reversa |
| Resumo | Introdução: A infecção por Brachyspira spp. é uma doença bacteriana que afeta os suínos de produção. Os principais sintomas causados incluem diarréia, perda de peso e anemia, podendo causar morte e consequentemente prejuízos econômicos. A doença é transmitida via oral-fecal, com os suínos se infectando ao ingerir água ou alimentos contaminados com fezes de suínos infectados por Brachyspira spp. Atualmente não existem vacinas comerciais contra disenteria suína, com os métodos de controle se baseando apenas no tratamento com antibióticos. Objetivo: Desenhar uma proteína sintética para utilização como antígeno vacinal contra infecção por Brachyspira spp. Metodologia: A construção in silico do antígeno foi realizada a partir da predição de epítopos de células T CD4+, T CD8+ e células B de proteínas já descritas na literatura como potenciais antígenos vacinais. O gene recombinante foi sintetizado quimicamente com sítios de restrição para as enzimas XhoI e NheI. O gene sintético foi amplificado a partir de PCR utilizando primers específicos. O produto de PCR purificado foi ligado ao vetor de clonagem pGEM-T Easy e ao vetor de expressão pET-28a, de acordo com instruções do fabricante. O próximo passo foi a etapa de transformação com a E. coli DH5α e E. coli BL21 (DE3) quimicamente competentes, incubadas em placa de Petri com meio LB ágar e antibióticos ampicilina ou canamicina e incubados. A partir da confirmação, colônias transformadas foram inoculadas em meio LB com ampicilina ou canamicina e crescidas para extração de DNA plasmidial. Com DNA extraído, foi feita a confirmação por PCR e digestão, com enzimas XhoI e NheI. Após confirmação, a colônia positiva transformada com pET-28a foi inoculada para expressão da proteína recombinante. A confirmação da expressão foi realizada por eletroforese em gel de poliacrilamida e Western Blotting. Resultados: O antígeno recombinante foi construído utilizando os epítopos com maiores valores de predição para células T CD4+ e T CD8+, combinados a epítopos com menores valores possíveis para células B. O gene sintético sintetizado foi amplificado e confirmado por eletroforese, confirmando o fragmento de 1200 pares de bases. Após a transformação e após incubação, observou-se colônia, indicando resultado positivo. Depois da extração de DNA plasmidial, a clonagem foi confirmada via eletroforese em gel de agarose, revelando as bandas características do inserto e dos vetores utilizados. O inserto clonado no PET-28a também foi confirmado por técnica de Sequenciamento de Sanger. A expressão da proteína foi confirmada após o aparecimento das bandas correspondentes ao tamanho de 42kDa, condizentes com o tamanho da proteína de interesse na membrana de nitrocelulose utilizada no Western Blotting. Conclusão: A proteína quimérica construída possui alto potencial como antígeno vacinal contra Brachyspira spp.. Experimentos in vivo devem ser realizados para avaliar a segurança e eficiência da formulação. |
| Palavras-chave | Antígeno vacinal, Brachyspira, Proteína recombinante |
| Forma de apresentação..... | Vídeo |
| Link para apresentação | Vídeo |
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