Resumo |
As abelhas são insetos polinizadores que contribuem para a manutenção dos ecossistemas, sendo na reprodução da flora nativa e geração de bens de alto valor econômico no setor alimentício. Dentre as espécies de abelhas, aquelas pertencentes à tribo Meliponini são abundantes em regiões tropicais e subtropicais. Um exemplo relevante é a Melipona quadrifasciata anthidioides, popularmente conhecida como mandaçaia, que apresenta um ferrão atrofiado e é popularmente mantida por meliponicultores por conta do seu valor socioeconômico. Buscando aprofundar os estudos quanto à microbiota intestinal dessas abelhas, o objetivo deste trabalho consistiu em isolar e identificar bactérias simbióticas e ambientais de M. quadrifasciata anthidioides para estudos futuros de preservação da espécie. A coleta das abelhas foi realizada na Mata do Paraíso, localizada na cidade de Viçosa-MG. Após anestesiar as abelhas, os intestinos foram retirados e macerados, para o isolamento. Para tal, utilizou-se uma placa de 96 poços, visando uma maior diversidade microbiana, incluindo bactérias de crescimento lento. Para isso, realizaram-se diluições seriadas em dois meios de cultura, um destinados a microrganismos heterofermentativos e outro a homofermentativos, a placa foi incubada a 32ºC por 24 a 48 horas. Após esse período, realizou-se o esgotamento por estria composta em placa de Petri e incubação em jarra de anaerobiose a 32ºC por 24 a 72 horas. Colônias isoladas, foram repicadas até obtenção colônias puras. Para a extração de DNA dos isolados bacterianos, foram selecionados isolados de acordo com características macromorfológicas. Em seguida, foi realizada a amplificação do gene codificador 16S rRNA por PCR, e os produtos obtidos foram purificados e sequenciados pelo método de SANGER. A identificação das sequências obtidas foi feito a partir do BLAST com o banco de dados do NCBI e a reconstrução de árvore filogenética realizada no software MEGA11, permitindo a identificação de 13 microrganismos. Dentre eles, foram identificadas 7 bactérias da família Lactobacillaceae do gênero Fructobacillus e 6 da família Streptococcaceae de gênero Lactococcus. Os isolados obtidos de M. quadrifasciata anthidioides, em especial os da família Lactobacillaceae, que possuem potencial biotecnológico e probiótico, contribuirão para um melhor entendimento da relação entre a abelha e sua microbiota, além das possíveis aplicações biotecnológicas e da preservação da espécie. |