"Ciências Básicas para o Desenvolvimento Sustentável"
24 a 26 de outubro de 2023
Trabalho 19372
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Agrárias |
| Área temática | Genética |
| Setor | Instituto de Ciências Agrárias - Campus Rio Paranaíba |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CNPq, Outros |
| Primeiro autor | Viviane Ribeiro de Barcelos |
| Orientador | PEDRO IVO VIEIRA GOOD GOD |
| Outros membros | Caroliny Helena Moreira Fernandes , Layla Roberta da Silva, Maria Elvira de Oliveira Domingues de Souza, Marina Bolela Valentini |
| Título | Comparação entre métodos de extração de DNA em Coffea arabica |
| Resumo | O café é uma das bebidas mais apreciadas no mundo e apresenta um mercado exigente para a melhor qualidade sensorial. O fator genético pode exercer um efeito acentuado na determinação do perfil do café, levando a identificação de características peculiares através de diferentes cultivares. Extrair o DNA do café para estudos genéticos não consiste em uma tarefa fácil, pois a folha do cafeeiro contém compostos químicos e polifenóis que podem interferir no processo de extração. Dessa forma, esse trabalho teve como objetivo testar, comparar e ajustar os protocolos de extração de DNA para obtenção de amostras puras e concentradas, permitindo seu uso em procedimentos de caracterização e diferenciação da estrutura genética de Coffea arabica. Para isso foram testados dois métodos de extração de DNA genômico utilizando o CTAB com agente detergente (Diniz et al., 2005 e Inglis et al., 2018). Foram utilizadas folhas jovens de 76 progênies de C. arabica oriundas do Campo Experimental Francisco de Melo Palheta (UFV Campus Rio Paranaíba- MG). Ao final das extrações foi avaliada a concentração de DNA e a relação A260/A280. A execução de ambos protocolos se deu em repetição com presença e ausência da etapa de purificação por RNAse para fins comparativos de perda do DNA. No primeiro método (Diniz et al., 2005) as amostras apresentaram uma relação A260/A280 entre 1,8 e 2,1, entretanto apresentaram uma concentração de DNA abaixo de 25 ng/ µL. As amostras com alta concentração apresentaram grau de pureza abaixo do esperado, entre 0,7 a 1,5, sugerindo uma presença significativa de proteínas e outras moléculas. No método de Inglis et al. 2018, sem a etapa de tratamento com RNAse, os resultados foram promissores com alta concentração de DNA (ng/ µL) e grau de pureza ideal. Porém, com a etapa de limpeza com RNAse, houve uma perda considerável de material, deixando as amostras em baixas concentrações. Portanto, foi possível identificar que o primeiro método, mais extenso e com maior manuseio das amostras resultou em DNA menos concentrado, porém com maior grau de pureza. Por outro lado, o segundo método, mais simplificado e com menor manuseio das amostras, quando utilizado sem a RNAse, apresentou resultados ideais para seguir outros procedimentos moleculares. Apesar da purificação por RNAse ser importante para a conservação a longo prazo das amostras, adotar essa etapa refletiu na perda de DNA, tornando a concentração menor e com menor qualidade. Dessa forma é sugerido o uso do método Inglis et al 2018 para obtenção de amostras de DNA para uso imediato e sem conservação a longo prazo. |
| Palavras-chave | café, melhoramento genético, extração de DNA |
| Forma de apresentação..... | Vídeo |
| Link para apresentação | Vídeo |
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