"Ciências Básicas para o Desenvolvimento Sustentável"
24 a 26 de outubro de 2023
Trabalho 19332
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Ensino médio |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | BIC-Júnior |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG, Outros |
| Primeiro autor | SARAH JUNIA GOMES DA COSTA |
| Orientador | TIAGO ANTONIO DE OLIVEIRA MENDES |
| Outros membros | Ananda Pereira Aguilar, Cíntia Soares Custódio, Maria Eduarda Pizzatto Nogueira, Rafael de Almeida Barros |
| Título | Otimização da produção de dsRNA para controle de Spodoptera frugiperda por RNA de interferência. |
| Resumo | A lagarta-do-cartucho (Spodoptera frugiperda) vem causando grandes perdas nas lavouras brasileiras e, entre elas, as plantações de soja. A principal forma de controle desse inseto é através da aplicação de pesticidas, que em larga escala criam grandes impactos no solo, água, ar e vida humana. Outra alternativa seria a utilização de RNA interferência em que ocorre a degradação do RNA mensageiro (mRNA), e conduz a redução ou eliminação completa da expressão do gene alvo. As produções de dsRNA podem ser realizadas “in vivo” ou “in vitro”, sendo o primeiro método largamente utilizado devido ao seu custo mais baixo e elevado rendimento de produção. O objetivo deste projeto foi produzir dsRNA, a partir da Escherichia coli HT115, para controlar a lagarta-do-cartucho. Para isso, foi realizada a clonagem e transformação da bactéria para a produção de dsRNA. Após a amplificação da região do gene alvo através do PCR, o produto foi ligado ao vetor pGEM-T Easy e este com o inserto foi transformado na E. coli DH5α, posteriormente, a confirmação foi feita através de um PCR com primers específicos para o inserto e com DNA plasmidial da E. coli transformada. Após este processo, o vetor recombinante foi colocado na E. coli HT115 e novamente confirmada a transformação através do PCR. O próximo passo foi a extração do RNA total para confirmar a expressão do dsRNA a partir da bactéria transformada. O RNA foi tratado com DNase e convertido em cDNA e este foi utilizado para a confirmação da expressão do dsRNA através do PCR. Para obter quantidades expressivas do dsRNA, foi realizada a extração de dsRNA a partir da E. coli HT115 transformada utilizando uma metodologia de baixo custo. A transformação, tanto da E. coli DH5α, quanto da E. coli HT115 foi confirmada através da presença do amplicon desejado por PCR usando primers específicos. Também pela mesma técnica do PCR foi confirmada a expressão e produção do dsRNA. Através deste trabalho foi possível produzir o dsRNA por meio de sistemas biológicos e a nossa expectativa é demonstrar a aplicabilidade dessa molécula no controle da lagarta-do-cartucho. |
| Palavras-chave | Palavras-chave: Spodoptera frugiperda, RNA interferência, produção de dsRNA por bactéria |
| Forma de apresentação..... | Painel |
| Link para apresentação | Painel |
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