"Ciências Básicas para o Desenvolvimento Sustentável"
24 a 26 de outubro de 2023
Trabalho 19112
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Medicina veterinária |
| Setor | Departamento de Veterinária |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Daiene Gaione Costa |
| Orientador | MARIA APARECIDA SCATAMBURLO MOREIRA |
| Outros membros | Jéssica Lobo Albuquerque Caldeira, Maria Eduarda Gomes do Rêgo, Maria Júlia Fernandes Netto, Richard Costa Polveiro |
| Título | Armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs) de caprinos estimuladas por Staphylococcus warneri isolado de mastite |
| Resumo | As NETs são estruturas extracelulares, similar a teias, composta por uma malha de DNA, histonas, proteínas antimicrobianas e proteinases, podendo ser um método alternativo para inativar e matar patógenos extracelulares. Detectar a formação desse mecanismo em caprinos é importante, já que pode auxiliar na saúde das glândulas mamárias e também no perfil imunológico dos animais com mastite. O estudo tem por objetivo avaliar a capacidade de Staphylococcus warneri, oriundo de mastite caprina, em induzir a formação das NETs na presença e na ausência da bactéria como também verificar a sua formação quando a fagocitose está comprometida. Após a obtenção dos PMNs caprino, a contagem foi ajustada para uma concentração final de 2×106 mL-1 em RPMI 1640. Em seguida, PMNs foram semeados em lamínulas de vidro redondas estéreis (13 mm) e estas colocadas em placas de cultura de 24 poços, incubadas por 1h, a 37°C em atmosfera umidificada com 5% de CO2. Quatro tratamentos distintos foram realizados: (i) controle negativo, contendo apenas PMNs caprino; (ii) PMNs adicionado de 100nM de PMA que é um forte indutor de NETs, como controle positivo; (iii)PMNs previamente estimulado com PMA e adicionado de citocalisina (10 µg/mL), um inibidor de fagocitose; (iv) PMNs adicionado de 2 x 107 mL-1 ufc/mL de S. warneri. Todos incubados por 1h, a 37°C em atmosfera umidificada com 5% de CO2. Após a incubação, as lamínulas de vidro com os PMNs anexados foram cuidadosamente lavadas três vezes em PBS e incubadas em Triton X-100 a 0,5%. Para fixar as NETs foi adicionado paraformaldeído a 4% aos poços por 1h. Em seguida, os mesmos foram corados com 4,6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) a 300nM, e observados usando um Fotomicroscópio Monocromático Olympus BX53. As estruturas filamentosas das NETs foram visualizadas e contadas manualmente dez campos distintos por lamínula com uma ampliação de 200x. Cada tratamento foi realizado em triplicata além de três repetições de cada ensaio. Observou-se uma maior quantidade das NETs na presença de S. warneri (5,51 NETs/campo) comparado ao controle negativo (0,93 NETs/campo), além de semelhança estatística ao controle positivo (4,41 NETs/campo). Já quando a fagocitose está comprometida, observou-se uma baixa formação de NETs (0,83 NETs/campo), assemelhando-se estatisticamente ao controle negativo. Conclui-se que S. warneri tem a capacidade de induzir a formação das NETs em caprinos e que a fagocitose é um mecanismo importante para a liberação dessas armadilhas. |
| Palavras-chave | pequenos ruminantes, bactéria, leite |
| Forma de apresentação..... | Vídeo |
| Link para apresentação | Vídeo |
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