"Ciências Básicas para o Desenvolvimento Sustentável"
24 a 26 de outubro de 2023
Trabalho 18873
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG, Outros |
| Primeiro autor | Bianca Muniz Lacerda Ventura |
| Orientador | LUCIANO GOMES FIETTO |
| Outros membros | Kissyla Vitória Reis Vitalino, Thatiana Ferraz Ferreira, TIAGO ANTONIO DE OLIVEIRA MENDES |
| Título | Desenvolvimento de formulação baseada em RNA antisenso para controle de murcha bacteriana |
| Resumo | Os patógenos Ralstonia solanacearum e Ralstonia pseudosolanacearum são responsáveis pela murcha bacteriana, doença que afeta diversas famílias botânicas, causando o murchamento repentino de toda a planta infectada e perdas de produção. Não existem alternativas aplicáveis para controle de Ralstonia spp., consequentemente o solo contaminado fica inviável para receber espécies suscetíveis à praga. Diante disso, o presente estudo tem o objetivo de produzir RNA antisenso (asRNA) para compor formulação de combate às bactérias causadoras de murcha bacteriana. A princípio selecionou-se alvos essenciais para o metabolismo básico da bactéria, entre eles o gene responsável pela expressão de DNA polimerase III subunidade α (dnaE), e analisou-se sua sequência por bioinformática para síntese de primers específicos. Após seleção das sequências para os primers, foi realizada análise de similaridade (BLAST) com organismos não alvos, para garantir que bactérias ambientais benéficas não fossem afetadas. As espécies de Ralstonia foram cedidas pela UFES e tiveram sua identidade confirmada por amplificação da região 16S por reação em cadeia da polimerase (PCR). Confirmada a identidade bacteriana foi necessário padronização da infecção de tomateiros (Lycopersicon esculentum Mill.) por R. solanacearum como modelo da doença de murcha bacteriana. Para isso, plantas com cerca de 25 dias tiveram suas raízes danificadas por cortes com posterior submersão em solução bacteriana e plantio em vasos individuais. O acompanhamento da evolução da doença mostrou que os organismos infectados apresentaram murcha irreversível das folhas, seguido de morte. A produção do asRNA se iniciou por clonagem molecular utilizando vetor pGEM-T Easy contendo fragmentos do gene dnaE. A inserção do vetor em células competentes (E. coli DH5α) para multiplicação dos vetores foi realizada por transformação com choque térmico. As células transformadas foram selecionadas por antibióticos e triagem azul-branca. A confirmação da inserção da sequência de interesse foi feita por PCR e eletroforese após extração de DNA plasmidial. Sequencialmente, o plasmídeo foi inserido em células E. coli HT115 através de choque térmico para promover maior expressão de asRNA. A seleção das colônias transformadas foi feita por antibióticos, e confirmada com PCR e eletroforese, demonstrando o sucesso no desenvolvimento de sistema contendo um gene essencial de Ralstonia spp.. Almeja-se em ensaios posteriores atestar a expressão dos asRNA e otimizá-la para minimizar os custos de produção da formulação, bem como verificar se estes influenciam na expressão do gene essencial e na viabilidade de Ralstonia spp., in vitro e in vivo. |
| Palavras-chave | Ralstonia spp., asRNA, murcha bacteriana |
| Forma de apresentação..... | Vídeo |
| Link para apresentação | Vídeo |
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