"Ciências Básicas para o Desenvolvimento Sustentável"
24 a 26 de outubro de 2023
Trabalho 18792
| ISSN | 2237-9045 |
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| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Agrárias |
| Área temática | Bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Primeiro autor | Bruna Pires Silva |
| Orientador | LUCIANO GOMES FIETTO |
| Outros membros | Eveline Teixeira Caixeta Moura, Isabel Samila Lima Castro, TIAGO ANTONIO DE OLIVEIRA MENDES |
| Título | RNA de interferência: uma nova perspectiva para silenciamento de genes em Hemileia vastatrix |
| Resumo | A ferrugem do café, principal doença que afeta os cafeeiros, é causada pelo fungo Hemileia vastatrix e é responsável por causar grandes prejuízos às plantações. O controle dessa doença pelo uso de cultivares com resistência durável tem sido um desafio para os produtores. Nesse contexto, o uso da metodologia de RNA de interferência (RNAi) tem se destacado e, por isso, o objetivo desse trabalho foi desenvolver uma formulação contendo dsRNA – produzido em Escherichia coli – encapsulado, com o objetivo de silenciar genes essenciais de H. vastatrix. Para isso, o gene escolhido foi uma polimerase específica e primers foram desenhados especificamente para ela. Os primers tiveram sua especificidade testada em Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). O vetor escolhido para clonagem foi o plasmídeo pGEM®-T Easy no qual foi inserido o gene alvo, a fim de produzir o vetor recombinante que, posteriormente, foi inserido em E. coli DH5α pelo método de choque térmico. As bactérias transformadas que foram produzidas, foram cultivadas na presença de antibióticos seletivos em meio de cultura sólido. Para confirmar a transformação, foi feita a extração do DNA plasmidial pelo método de lise alcalina e posterior PCR para amplificação e eletroforese em gel de agarose. Com os plasmídeos extraídos da DH5α, foram feitas as transformações na E. coli HT115 – escolhida por não ter a RNAse III que degrada o dsRNA – da mesma forma que foi feita anteriormente e, para a confirmação, foi feita a extração do DNA plasmidial, a PCR e eletroforese. A produção do dsRNA foi feita com inóculos da HT115 transformada cultivados em meio Luria Bertani (LB) contendo ampicilina para posterior processo de indução/extração. A expressão do gene alvo foi confirmada com o tratamento com DNAse, a síntese de cDNA e a PCR para amplificação, seguido da eletroforese. Com o dsRNA produzido e devidamente confirmado, foi possível produzir a formulação com o encapsulamento foi validada em casa de vegetação e em campo. Portanto, pode-se concluir que nesse trabalho foram desenvolvidos protocolos eficientes de extração e purificação do dsRNA em bactérias E. coli. e, com isso, essa metodologia poderá ser usada para silenciamento gênico por meio do mecanismo de RNAi e visando apenas a inativação do patógeno. |
| Palavras-chave | HT115, RNAi, silenciamento gênico. |
| Forma de apresentação..... | Painel |
| Link para apresentação | Painel |
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