"Ciências Básicas para o Desenvolvimento Sustentável"
24 a 26 de outubro de 2023
Trabalho 18703
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Ensino médio |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | PIBIC Ensino Médio |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | Outros |
| Primeiro autor | Isabella Araújo Sousa Neves |
| Orientador | LUCIANO GOMES FIETTO |
| Outros membros | Bruna Pires Silva, Edson Mario de Andrade Silva, Isabel Samila Lima Castro, TIAGO ANTONIO DE OLIVEIRA MENDES |
| Título | Clonagem de Escherichia coli HT 115 para a produção de dsRNA em larga escala |
| Resumo | O café é um dos principais produtos de exportação do Brasil. A ferrugem do cafeeiro, causada pelo fungo Hemileia vastatrix, é a principal doença que acomete a cultura. Cultivares com resistência durável a ferrugem tem sido um constante desafio, pois ao longo do tempo novas raças do patógeno surgem com a capacidade de suplantação da resistência. Assim, abordagens baseadas em RNA de interferência (RNAi) tem ganhado destaque nos últimos anos. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi a seleção e a transformação de um gene alvo, essencial para H. vastatrix, em bactéria Escherichia coli HT 115. O gene alvo escolhido, uma helicase (HEL3), foi selecionado por meio de genômica comparativa e os primers correspondentes foram sintetizados por empresa especializada. A especificidade do alvo foi testada por meio de reação em cadeia da polimerase (PCR). A sequência foi recombinada em vetor de clonagem plasmidial pGEM®-T Easy e transformada por meio de choque térmico em bactérias E. coli DH5α. A extração do DNA plasmidial das colônias de bactérias transformadas foi realizada pelo método de lise alcalina. A transformação em E. coli HT115, utilizando os plasmídeos extraídos da bactéria DH5α, também foi realizada por meio da metodologia de choque térmico. O gene alvo HEL3 se mostrou específico para o patógeno e ausente na planta hospedeira. Foi utilizada a estratégia de transformação primeiro em E. coli DH5α e depois em E. coli HT 115, pois foi observada uma maior eficiência de transformação do que na transformação direta. A HT115 é bem adaptada a cultivo em fermentadores industriais. Esta bactéria é deficiente de genes de RNAse III, responsável pela degradação de dsRNA, resultando em significativos rendimentos de produção desta molécula. Reação de PCR, utilizando o plasmídeo e o primer específico para o alvo, confirmou a transformação. Dessa forma, foram obtidas colônias de E. coli HT 115 transformadas com o gene alvo HEL3 que poderão ser utilizadas para a produção de dsRNA em larga escala para o uso em metodologias de RNAi, que visam o silenciamento de genes essenciais do patógeno. Ainda, as moléculas de dsRNA possuem o potencial para serem utilizadas em formulações de defensivos agrícolas para o controle de H. vastatrix no campo |
| Palavras-chave | RNAi, Café, Hemileia vastatrix |
| Forma de apresentação..... | Painel |
| Link para apresentação | Painel |
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