"Ciências Básicas para o Desenvolvimento Sustentável"
24 a 26 de outubro de 2023
Trabalho 18690
| ISSN | 2237-9045 |
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| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | Outros |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG, FAPESC, FUNARBE, Outros |
| Primeiro autor | Halerrandro dos Santos Brito |
| Orientador | CIRO CESAR ROSSI |
| Outros membros | Luiza de Oliveira Possa, Renato Lima Senra, Vinicius dos Santos Romagnoli, Wyver Moreira Goncalves |
| Título | Desenvolvimento de proteína recombinante para solução vacinal contra a Lawsonia intracellularis em suínos |
| Resumo | Doenças infecciosas apresentam grande relevância na produção suína, destacando-se a Enteropatia Proliferativa Suína, causada pela bactéria Lawsonia intracellularis, uma espécie gram-negativa e intracelular obrigatória, que infecta o trato gastrointestinal destes animais. Tal doença é responsável por grandes perdas econômicas no sistema de produção, relacionada à piora alimentar, redução do ganho de peso e aumento nos índices de mortalidade. Diante disso, o desenvolvimento de uma formulação vacinal contra a Lawsonia intracellularis se faz necessária. Objetivo: Desenvolver uma proteína recombinante com epítopos de células T CD8+ e T CD4+ identificados por imunoinformática e integrar o antígeno em formulações vacinais. Metodologia: A construção do antígeno foi realizada pela predição de epítopos de células T CD4+, T CD8+ e células B de proteínas encontradas na literatura. Diante disto, o gene foi sintetizado contendo sítios para as enzimas de restrição XhoI e NheI. O gene sintético foi amplificado pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), e o produto foi purificado e submetido a uma ligação com vetor de clonagem pGEM-T Easy, transformação em E. coli DH5α. Posteriormente, foi feita clonagem em vetor de expressão pET-28a e transformação em E. coli BL21 (DE3). A partir da confirmação da transformação, colônias foram inoculadas em meio Luria Bertani (LB) com ampicilina ou canamicina, com incubação overnight sob agitação de 180 rpm a 37°C para extração do DNA plasmidial. Após a extração, foi realizada PCR para confirmação, seguida de digestão com enzimas de restrição XhoI e NheI. Após a confirmação, a colônia positiva transformada com pET-28a foi inoculada para a expressão da proteína recombinante. A confirmação da expressão foi realizada por SDS-PAGE e Western Blotting. Resultados: O gene sintético sintetizado foi amplificado e confirmado por eletroforese em gel de agarose, amplificando um fragmento de 1212 pares de bases. Após a extração de DNA plasmidial, foi confirmada a clonagem por eletroforese em gel de agarose por observação de bandas características do inserto e dos vetores utilizados em cada etapa. O inserto clonado no PET-28a foi confirmado por Sequenciamento de Sanger. A expressão da proteína foi confirmada após o aparecimento das bandas correspondentes ao tamanho de 41 kDa, confirmando o tamanho teórico da proteína. Tal resultado foi confirmado por Western Blotting utilizando anticorpo his-tag. Conclusão: A proteína quimérica construída possui alto potencial como antígeno vacinal contra Lawsonia intracellularis. Além disso, experimentos in vivo devem ser realizados para avaliar a segurança e eficiência da formulação. Financiamento: CNPq, CAPES, FAPEMIG, Dechra Phamaceuticals, Animalnutri Ciência e Tecnologia. |
| Palavras-chave | Vacina, Lawsonia, clonagem. |
| Forma de apresentação..... | Vídeo |
| Link para apresentação | Vídeo |
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