"Ciências Básicas para o Desenvolvimento Sustentável"
24 a 26 de outubro de 2023
Trabalho 18683
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG, Outros |
| Primeiro autor | Sávio Ferreira Mendes |
| Orientador | TIAGO ANTONIO DE OLIVEIRA MENDES |
| Outros membros | DALILA SENI BUONICONTRO, Marcela de Freitas Silva, Renato Lima Senra |
| Título | Formulações de dsRNA para controle de nematoide-das-galhas (Meloidogyne javanica) por RNA de interferência |
| Resumo | Nematoides-das-galhas são parasitas obrigatórios de plantas que causam perdas de produção e econômicas expressivas, sendo Meloidogyne javanica uma das espécies de maior risco fitossanitário. A principal estratégia de manejo se baseia na aplicação de nematicidas químicos, que frequentemente apresentam riscos ambientais e de toxicidade para outros organismos, incluindo humanos e a própria plantação. Abordagens genéticas utilizando RNA de interferência (RNAi), que consiste em introduzir moléculas de RNA de fita-dupla (dsRNA) que silenciam genes essenciais para a sobrevivência e a infecção dos nematoides, têm sido extensivamente estudadas e bem-sucedidas. A produção do dsRNA em sistemas bacterianos possui menor custo comparada à síntese química ou in vitro, e abordagens de delivery do dsRNA com nanopartículas podem ser uma alternativa viável para fitonematoides. Assim, o objetivo deste trabalho foi produzir uma formulação de dsRNAs para controle de M. javanica através de engenharia genética e expressão heteróloga em bactérias. M. javanica foi multiplicado em raízes de tomate Santa Clara, os ovos foram extraídos por trituração em liquidificador com NaClO e utilizados para eclosão de juvenis de segundo estágio. As sequências de genes essenciais foram obtidas de transcriptomas e comparadas com sequências de C. elegans; as regiões conservadas foram utilizadas para desenho dos primers, adicionados do promotor da T7 RNA polimerase. O RNA total de ovos e juvenis, extraído com RNeasy Mini Kit, foi tratado com DNAse para a síntese de cDNA, que serviu de molde para a amplificação dos genes-alvo por PCR. O amplicon, obtido de um dos alvos, foi ligado ao plasmídeo pGEM T Easy e o produto foi transformado em E. coli DH5α, para multiplicação, e, subsequentemente, em E. coli HT115, para a produção do dsRNA. As transformações foram confirmadas por eletroforese, PCR e sequenciamento de Sanger. A expressão de dsRNA foi induzida com diferentes concentrações de IPTG, que não demonstraram diferença de rendimento entre si. A extração de RNA total de E. coli HT115 foi feita com trizol e a confirmação da expressão do dsRNA foi confirmada por síntese do cDNA e PCR. Paralelamente, o dsRNA também foi produzido in vitro, por meio do kit MEGAscript® RNAi e utilizando o produto de PCR do gene-alvo como molde, para atuar como controle em testes de atividade. Assim, moléculas de dsRNA, tendo um gene essencial de M. javanica como alvo, foram produzidas in vitro e heterologamente em E. coli. Ensaios futuros serão planejados para avaliar a atividade do dsRNA, encapsulado e não-encapsulado, na expressão do gene e na viabilidade de juvenis de M. javanica in vitro. O trabalho contou com financiamento das seguintes agências: CNPq, FAPEMIG, Capes, Consórcio Pesquisa Café, EMBRAPA-Café e Ourofino Agrociências. |
| Palavras-chave | Nematoide-das-galhas, RNAi, dsRNA |
| Forma de apresentação..... | Painel |
| Link para apresentação | Painel |
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