"Ciências Básicas para o Desenvolvimento Sustentável"

24 a 26 de outubro de 2023

Trabalho 18401

ISSN 2237-9045
Instituição Universidade Federal de Viçosa
Nível Graduação
Modalidade Pesquisa
Área de conhecimento Ciências Agrárias
Área temática Bioquímica
Setor Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular
Bolsa FAPEMIG
Conclusão de bolsa Não
Apoio financeiro CAPES, CNPq, FAPEMIG
Primeiro autor Cíntia Soares Custódio
Orientador LUCIANO GOMES FIETTO
Outros membros Ananda Pereira Aguilar, EUGENIO EDUARDO DE OLIVEIRA, Rafael de Almeida Barros, TIAGO ANTONIO DE OLIVEIRA MENDES
Título Nanoencapsulamento de dsRNA para controle de Euschistus heros em lavouras
Resumo Euschistus heros, o percevejo marrom, afeta diversas culturas como soja, algodão e girassol, através da sucção da seiva, dos ramos ou hastes, além de injetar toxinas. Logo, acarreta um dano de até 60% do potencial produtivo da lavoura, além de limitar e prejudicar a qualidade dos grãos, levando a sérios prejuízos econômicos. Como alternativa aos agroquímicos, o mecanismo de silenciamento gênico de RNA de interferência pode ser usado para provocar morte ou prejudicar o desenvolvimento deste patógeno. Esta é uma técnica mediada por pequenos RNAs dupla fitas (dsRNA) capazes de reconhecer e clivar uma sequência de RNA mensageiro específico ou inibir sua tradução, impedindo assim, a expressão de um gene essencial para sobrevivência do patógeno. O objetivo desse trabalho foi desenvolver uma formulação de dsRNA para controle do percevejo marrom de soja (E. heros) por RNA de interferência (RNAi). Para produzir o dsRNA foi desenvolvido um método in vivo, a fim de otimizar e reduzir os custos produção, que consiste na amplificação do gene de E. heros por PCR para inserir no plasmídeo pGEM-T Easy, possibilitando a transformação na bactéria Escherichia coli DH5∝, de modo a multiplicar o vetor recombinante que contém o gene de interesse. Em seguida, o plasmídeo foi extraído e uma PCR com primer específico, confirmou a presença do gene desejado. Dessa forma a E.coli HT115, que tem uma elevada expressão de dsRNA (por ser deficiente em RNAseIII - enzima que degrada o dsRNA), foi transformada com o plasmídeo obtido, a fim de produzir um maior número o alvo escolhido. Para confirmar a presença do inserto, foi preciso extrair e tratar o dsRNA com DNAse e sintetizar o cDNA, além de amplificar por PCR, para visualizar a banda esperada através do gel de agarose. Já a clonagem foi confirmada por sequenciamento de Sanger, que revelou 97,72% de identidade entre a sequência alvo e o fragmento obtido, usando BLAST. A fim de preservar e estabilizar sua estrutura, a formulação foi desenvolvida de maneira a nanoencapsular o dsRNA do gene candidato, evitando sua degradação pós aplicação em campo, por danos ambientais. Para a formulação, foram feitos alguns testes usando uma concentração de 40µg/100mL. No primeiro foi feita uma exposição total, através da aplicação com spray brush, em volume similar ao aplicado em campo. Já na segunda foi realizada uma aplicação tópica de dois microlitros no dorso do percevejo. Como resultado, após exposição de 48h foi obtida uma mortalidade de 90% de E. heros e 78% com a aplicação no dorso. O que só foi possível devido ao desenvolvimento de um método in vivo que potencializa e diminui os custos de produção. Além do nanoencapsulamento que estabiliza e impede a degradação deste material pós aplicação. Diante disso, a formulação produzida com o dsRNA do gene essencial, teve a presença do inserto confirmada, apontado que este princípio apresenta resultados promissores, capazes de trazer uma nova perspectiva para o agronegócio.
Palavras-chave Euschistus heros, dsRNA, formulação
Forma de apresentação..... Painel
Link para apresentação Painel
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