Resumo |
Fungos tem grande importância nas indústrias farmacêuticas, pois várias substâncias de origem fúngicas possuem propriedades farmacológicas, como os antibióticos da classe das penicilinas e cefalosporinas, o imunossupressor ciclosporina, agentes redutores de colesterol, como a lovastatina, além diversos outros fármacos em potenciais como a aspercilina, que possui para doenças gastrointestinais e o agente antifúngico papulacandina. O fungo endofítico Phaeoacreomonium sp., produz as substâncias isoaigialona A, B e C e aigialona, as quais apresentam atividades in vitro contra fungos e células cancerígenas. O objetivo deste projeto foi isolar quantidades suficiente das substâncias para realização de bioensaios para comprovar a atividade terapêutica in vitro. O fungo foi crescido no meio batata dextrose ágar BDA por sete dias, na sequência foi repicado para o meio caldo de batata dextrose e cultivado por 28 dias. Após este período, o caldo fermentado foi separado do micélio, extraída com acetato de etila e seco em rotaevaporador resultando no extrato. Aproximadamente 100mg de extrato foi diluído em 1 mL de metanol, filtrado em membrana de 45 µm, injetado em cromatógrafo líquido de alta eficiência (CLAE), utilizando coluna Phenomenex, modelo Gemini (250 x 25 mm, 10 micras) e eluente Acetonitrila/Água 54/46, com fluxo de 5 mL/min. A amostra foi inserida via injetor Rheodine com alça de amostragem de 500 μL. Os picos foram monitorados em detector UV/Vis (SPD-20A, Shimadzu) e, coletados nos tempos de retenção. Estes foram secos em rotaevaporador, transferidos para frascos de penicilina tarados e secos com ar comprimido. A pureza das substâncias foi evidenciada por análise por CLAE analítico, utilizando coluna Phenomenex, modelo Luna (250 x 4.6 mm, 5 micras) com eluente Acetonitrila/Água 54/46 e fluxo de 1mL/min. A detecção foi realizada no detector UV/Vis (SPD-20A, Shimadzu) no comprimento de onda de 254 nm. O injetou 20 μL da amostra, volume alça de amostragem. Os três primeiros picos coletados no CLAE preparativo correspondente as substâncias isoaigialona A (tR= 9,29 min.; 25,0 mg), B (tR=13,09 min.; 25,0 mg) e aigialona (tR=10,46 min.; 64,6 mg). A pureza foi confirmada por análise via CLAE analítico, onde se verificou apenas um pico. O pico 4 continha a substância isoaigialona C em mistura com a B. A quantidade purificada das substâncias isoaigialona A e B e aigialona são suficientes para realização de novos bioensaios de citotoxicidade frente a células cancerígenas. |