"Ciências Básicas para o Desenvolvimento Sustentável"
24 a 26 de outubro de 2023
Trabalho 17759
| ISSN | 2237-9045 |
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| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Fisiologia |
| Setor | Departamento de Biologia Vegetal |
| Bolsa | FAPEMIG |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | FAPEMIG |
| Primeiro autor | Gabrielli Cristina Marques dos Santos |
| Orientador | AGUSTIN ZSOGON |
| Outros membros | Karla Gasparini dos Santos |
| Título | Otimização das técnicas de transformação e regeneração in vitro de Solanáceas |
| Resumo | O tomateiro (Solanum lycopersicum) é uma espécie modelo e também um cultivo de grande relevância econômica, o que o torna um interessante alvo para estudos de regeneração in vitro e transformação genética. O aprimoramento de técnicas que otimizem a transformação e regeneração in vitro pode ser uma ferramenta essencial para o melhoramento de cultivares comerciais, a fim de aprimorar características de interesse econômico (ex: tamanho de frutos, resistência à estresse hídrico ou insetos, pragas) em um tempo mais curto e de fácil identificação em comparação ao melhoramento clássico. Diante disso, nosso trabalho tem por objetivo desenvolver e otimizar protocolos eficientes para transformação genética e regeneração in vitro que possa ser utilizado em diferentes espécies de tomateiro e expandida para outras espécies do gênero Solanum. Inicialmente os testes serão realizados na cultivar Micro-Tom (MT), um modelo para estudos em tomateiro. Foram testados diferentes tipos e concentração de hormônios vegetais (auxinas e citocininas) e diferentes concentrações de antibióticos para indução da regeneração in vitro e controle do crescimento de Agrobacterium tumefaciens, respectivamente. A transformação foi realizada via Agrobacterium tumefaciens GV3101 contendo uma construção para realizar o knockout do gene terminal flower 1. Nós verificamos que os hormônios ácido 1-naftalenacético e 6-benzilaminopurina nas concentrações 0,4 μM e 5 μM, obtiveram o melhor resultado e custo/benefício para a regeneração de MT utilizando cotilédones de 8 dias como explante. Para realizar a transformação, nós testamos o crescimento de A. tumefaciens GV3101 através de diferentes O.D. (optical density) utilizando espectrofotômetro. Observamos que a melhor O.D. para infecção, foi a de 0,5, na qual não observamos infecção muito agressiva e conseguimos manter a viabilidade dos explantes. Já para o controle do crescimento da Agrobacterium nós testamos concentrações de timentin de 25mg/mL, 50mg/mL e 100mg/mL percebemos que na concentração de 25mg/mL não houve inibição suficiente do crescimento e nas concentrações de 50mg/mL e 100mg/mL houve a supressão adequada do crescimento. Diante desse resultado, optamos por utilizar a concentração de 50mg/mL e mantê-la durante 4 semanas no meio de regeneração para obter um maior controle do crescimento da Agrobacterium. A retirada do timentin anterior a esse período (como sugerido em alguns artigos) acabou por ocasionar perda dos explantes por crescimento excessivo posterior da Agrobacterium. Diante dos ajustes realizados conseguimos utilizar de forma eficiente a GV3101 e obter regeneração dos explantes com formação de calos, folhas e meristemas. Em consequência desses resultados, verificamos que os ajustes realizados foram eficientes e que poderão ser testados em outras espécies de solanáceas para verificar sua reprodutibilidade e eficácia. |
| Palavras-chave | transformação genética, solanum, agrobacterium |
| Forma de apresentação..... | Painel |
| Link para apresentação | Painel |
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