Resumo |
A antracnose é uma doença que acomete o feijoeiro-comum (Phaseolus vulgaris L.), comprometendo a produtividade. O agente causal da antracnose é o fungo hemibiotrófico Colletotrichum lindemuthianum. Em geral, as pectinases são as principais enzimas responsáveis pela maceração do tecido vegetal e são importantes para o desenvolvimento da doença. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi caracterizar o gene pgaCl4 e a poligalacturonase que ele codifica em C. lindemuthianum. A identificação dos íntrons foi realizada por meio da análise de sequências consenso e por meio da comparação com sequências de outras poligalacturonases de fungos. A identificação dos cis-elementos presentes na região promotora foi realizada em 1.200 pb (pares de bases) acima do códon de iniciação da tradução por meio de busca manual das sequências de reconhecimento de diferentes proteínas reguladoras. A sequência de aminoácidos de PgaCl4 foi comparada com a sequência de aminoácidos de poligalacturonases de outros 18 fungos, obtidas no banco de dados do NCBI (National Center for Biotechnology Information) e alinhadas utilizando a ferramenta online Clustal Omega. Uma árvore filogenética foi construída utilizando o software MEGA 5.0 com o alinhamento das sequências de aminoácidos obtidas. Foi realizada a análise da expressão diferencial do gene pgaCl4 por qPCR nas diferentes fases da interação C. lindemthianum-feijoeiro (penetração, fase biotrófica e fase necrotrófica). A sequência codificadora putativa do gene pgaCl4 possui 1.389 pb e a proteína deduzida apresenta 463 aminoácidos. Foram identificados 10 íntrons. A análise da região promotora revelou alguns cis-elementos putativos e sítios de ligação a fatores de transcrição relacionados a regulação de pgaCl4. A proteína PgaCl4 de C. lindemuthianum apresentou alta identidade com a proteína putativa exo-poligalacturonase B de Colletotrichum trifoli (99,14%), Colletotrichum sidae (98,82%) e Colletotrichum orbiculare (98,92%). A análise filogenética mostrou a formação de três grupos distintos de Colletotrichum spp. Foram detectados transcritos do gene pgaCl4 em todas as fases de desenvolvimento do fungo na planta, mas houve expressão diferencial significativa na fase necrotrófica. A análise do gene pgaCl4 auxiliará na compreensão do papel das pectinases na antracnose do feijoeiro-comum. |