“Inteligência Artificial: A Nova Fronteira da Ciência Brasileira”
19 a 24 de outubro de 2020
Trabalho 13948
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Agrárias |
| Área temática | Agronomia |
| Setor | Instituto de Ciências Agrárias - Campus Rio Paranaíba |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Raquel Aime Louroza Ribeiro |
| Orientador | PEDRO IVO VIEIRA GOOD GOD |
| Outros membros | Agnes de Oliveira Maciel, Mayumi Furuya de Assis, Paloma Vitoria Felix Duarte, VINICIUS GUIMARAES NASSER |
| Título | Seleção de marcadores SSR para resistência da soja ao nematoide do cisto para genotipagem por HRM em RT-PCR |
| Resumo | Incorporar resistência ao nematoide do cisto (Heterodera glycines) em novas cultivares de soja (Glycine max) é desafiador devido à sua arquitetura genética complexa. São relatados dois loci de resistência majoritários, denominados Rhg1 (cr.18) e Rhg4 (cr.8). As variações entre os alelos de Rhg1 e suas interações com Rhg4 determinam o nível de resistência do genótipo e a raça especificidade em relação ao NCS. Marcadores microssatélites (SSR) são utilizados para genotipar esses loci e outros QTL associados a resistência ao NCS. Alguns estudos têm sido realizados para validação do método High Resolution Melting (HRM), via RT-PCR, com marcadores SSR para detectar polimorfismos em diferentes espécies vegetais. O objetivo deste trabalho foi realizar uma seleção de marcadores SSR para os loci de Rhg1, Rhg4 e outros QTL previamente estabelecidos pela literatura para futuras genotipagens HRM. O DNA genômico de 20 genótipos de soja foi extraído pelo método CTAB. A qualidade da extração foi avaliada em gel de agarose (1%) e a quantificação do DNA realizada por espectrofotometria (A260/280). Os principais marcadores para os loci Rhg1 e Rhg4, satt309 e sat_162, respectivamente, foram submetidos a um teste de gradiente com oito temperaturas de anelamento (Ta) diferentes em PCR convencional. As reações PCR foram realizadas em volume final de 15µL com 3mM de MgCl2, 0,2mM de dNTP, 0,3mM para cada primer, 1U de Taq Polimerase e 30ng de DNA com inclusão de controle negativo para teste de contaminação. O resultado das reações foi visualizado em gel de agarose (3%). A melhor Ta para os dois primers foi selecionada para a triagem do tamanho dos amplicons de outros 24 marcadores SSR (Satt038, Satt275, Satt610, Sat_157, Satt233, Satt187, GMES6186, Satt466, Satt162, Satt368, Satt215, Satt196, Satt345, Sat_286, Satt376, Satt466, Satt452, Satt082, Satt202, Satt396, Sat_141, Satt690, Satt551 e Satt570). O gel de agarose de qualidade de extração indicou 50% das amostras extraídas com DNA sem degradação e contaminação de RNA. A quantificação de A260/280 variou entre 0,95 e 2,00. A amostra de DNA do genótipo Suprema, foi selecionada para as avaliações seguintes. As reações de gradiente de Ta para Satt309 e sat_162 indicaram a Ta de 55,4°C. Entre os 24 SSR testados, quatro (Sat_157, Satt345, Satt286 e Satt466) amplificaram bandas inespecíficas. Os SSR Satt082, Satt690, Satt570 e Satt368 não amplificaram ou apresentaram bandas fracas. O primer GMES6186 apresentou contaminação. Esses resultados indicam que para esses marcadores são necessários testes adicionais de otimização das condições de PCR. O restante dos marcadores apresentou amplificação com bandas nítidas, sem arraste ou bandas inespecíficas com tamanho entre 150 a 300pb indicando que são candidatos para validação em genotipagem para resistência ao NCS via SSR-HRM em RT-PCR. |
| Palavras-chave | Heterodera glycines, Glycine max, SSR |
| Forma de apresentação..... | Painel |
| Link para apresentação | Painel |
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