“Inteligência Artificial: A Nova Fronteira da Ciência Brasileira”
19 a 24 de outubro de 2020
Trabalho 13931
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Amanda de Ambrósio Pacheco |
| Orientador | GUSTAVO COSTA BRESSAN |
| Outros membros | Gabriela Alves Moreira, Juliana Regina Ribeiro de Souza, Lucas Viana Gomes Silva, Mônica Maria Magalhães Caetano |
| Título | Avaliação do efeito do silenciamento de SRPKs em modelo de melanoma metastático murino |
| Resumo | A metástase é uma etapa crítica na progressão do câncer, caracterizada pelo desprendimento das células cancerosas do tumor primário e entrada no sistema circulatório, seguida de migração e invasão de tecidos ou órgãos distantes. A desregulação da expressão ou atividade da Serine Arginine Proteín Kinases (SRPKs) está associada a mecanismos relacionados a progressão do tumor e formação de metástases. Nesse contexto, estudos que buscam decifrar o papel oncogênico das SRPKs são importantes para subsidiar o desenvolvimento de novas estratégias antitumorais. O clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR) associado à nuclease Cas9 são considerados uma ferramenta útil para gerar interrupção estável de genes em células de mamíferos. Este trabalho teve então como objetivo avaliar o efeito do silenciamento de SRPK1, SRPK2 e duplamente SRPK1/2 por CRISPR/Cas9 na progressão do melanoma metastático murino in vivo. As atividades realizadas consistiram no cultivo das células B16F10 em meio RPMI suplementado com 10% de soro fetal bovino (SFB), mantidas a 37°C com 5% de CO2 e lise celular das mesmas. Em seguida foram realizados experimentos de western blotting utilizando os anticorpos primários anti-SRPK1 (BD Bioscences, #611072) e anti-SRPK2 (BD Biosciences, #611118) para se confirmas a diminuição da expressão de SRPKs em clones obtidos por nossa equipe via CRISPR/Cas9. Em seguida, foram realizados dois experimentos in vivo para avaliar o efeito do silenciamento de SRPKs no desenvolvimento do melanoma metastático murino. Primeiramente, 2 x 105 células foram inoculadas por via subcutânea no flanco direito de camundongos. Foram então medidos os tamanhos dos tumores periodicamente. Num segundo experimento in vivo, foi realizada a inoculação de células na via intravenosa (veia caudal) com o objetivo de analisar a formação de nódulos pulmonares. Os resultados obtidos em ambos os ensaios indicam que ao contrário de SRPK1, o silenciamento de SRPK2 impacta negativamente a formação de metástases do melanoma metastático murino. Esses dados abrem novas perspectivas para o estudo sobre o papel dessas enzimas na progressão do melanoma e outros tipos de câncer. |
| Palavras-chave | SRPK, CRISPR/Cas9, matástases. |
| Forma de apresentação..... | Painel |
| Link para apresentação | Painel |
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