“Inteligência Artificial: A Nova Fronteira da Ciência Brasileira”
19 a 24 de outubro de 2020
Trabalho 13752
| ISSN | 2237-9045 |
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| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Gabriele Lopes Knop |
| Orientador | TIAGO ANTONIO DE OLIVEIRA MENDES |
| Outros membros | ANDREA DE OLIVEIRA BARROS RIBON, JULIANA LOPES RANGEL FIETTO, Luana Maria Pacheco Schittino, Renato Lima Senra |
| Título | Padronização da expressão heteróloga do Fator VII de coagulação sanguínea humano em Escherichia coli e Leishmania tarentolae selvagem e otimizada |
| Resumo | A produção de glicoproteínas terapêuticas utiliza células dependentes de meios de cultivo complexos, caros e com baixos rendimentos, características responsáveis pelo elevado custo de produção que refletem nos altos preços dos medicamentos que oneram gastos familiares e do sistema público de saúde. O protozoário tripanossomatídeo Leishmania tarentolae, parasito de lagartos, tem sido sugerido para expressão heteróloga de glicoproteínas, visto que é não patogênico para mamíferos e pode ser utilizado em produção de larga escala com custos reduzidos. Outros fatores, como dobramento e modificações pós-traducionais de proteínas similares a mamíferos, tornam esse protozoário ainda mais vantajoso se comparado a bactérias e leveduras, por exemplo, visto que estes sistemas de expressão não possuem maquinaria celular para tais modificações com o padrão específico de humanos, podendo comprometer a funcionalidade das proteínas produzidas. O Fator VII de coagulação sanguínea é uma proteína terapêutica glicosilada, e essa modificação traducional é essencial para sua função e estabilidade. A deficiência ou mau funcionamento do Fator VII pode ocasionar doenças como hemofilia. O objetivo do projeto é desenvolver uma plataforma de expressão com padrão de glicosilação específico de humanos e de baixo custo para produção de Fator VII utilizando linhagens de Leishmania tarentolae geneticamente otimizadas. Primeiramente ocorreram a síntese do gene Fator VII com códons otimizado e o desenho de primers específicos. Na sequência, fez-se a amplificação do gene sintético por PCR, clonagem em pGEM-T e no vetor de expressão pLEXSY. Também foi realizada a transformação com o vetor pET-28a clonado e expressão proteica em Escherichia coli Artic Express e consequente análise por SDS-PAGE e Western Blotting. Observou-se eficiência na clonagem e expressão proteica em Escherichia coli e também a confirmação da clonagem do Fator VII em vetor de expressão pLEXSY, característico de Leishmania tarentolae. Espera-se padronizar a expressão proteica e a purificação do Fator VII em Escherichia coli e validar a clonagem no vetor de expressão para leishmania, para também realizar a purificação nesse sistema. Com isso, pretende-se otimizar a expressão e purificação da glicoproteína Fator VII em E. coli e L. tarentolae visando testes de comparação de atividade, funcionalidade e uso terapêutico para que torne-se possível a redução dos custos de produção e, consequentemente, a redução do custo de medicamentos que têm como base essa proteína. |
| Palavras-chave | Bioquímica, expressão heteróloga, glicoproteínas |
| Forma de apresentação..... | Painel |
| Link para apresentação | Painel |
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