Resumo |
INTRODUÇÃO: A aplicação de inibidores de proteases (IPs) ex-vivo normalmente é reportado como ineficiente nos trabalhos, uma vez que as Lepidopteras apresentam um rápido mecanismo de adaptação co-evolutivo com as plantas. Os principais meios utilizados pelo inseto são: superprodução da enzima alvo, ativação de genes produtores de enzimas resistentes à inibição ou inativação por clivagem do inibidor. Entretanto, a maioria desses estudos utilizam moléculas grandes e instáveis, apresentando sítios de clivagem por outras classes de proteases ocasionando em sua inativação. OBJETIVO: Sendo assim, nós avaliamos a estabilidade de dois tripeptídeos (GORE1 e GORE2) complexados com tripsina de A. gemmatalis por dinâmica molecular e ensaios de inibição in vivo, comparando-os com SKTI. MATERIAL E MÉTODOS: Primeiro, as estabilidades dos peptídeos com tripsina modelada por Phyre2 de A. gemmatalis foram avaliadas por dinâmica molecular, imitando as condições do intestino do inseto. As atividades inibitórias de GORE1, GORE2 e SKTI (7mg/mL) armazenados à temperatura ambiente foram avaliadas durante 12 dias com extrato do intestino de A. gemmatalis. Depois disso, foi avaliada a resposta dose-dependente dos inibidores (0.015, 0.030, 0.060, 0.12 p/v) in vivo, durante 12h. RESULTADO: As predições in silico mostraram que ambos os peptídeos são igualmente estáveis durante toda simulação (15 ns), complexados ou não com Tripsinas. GORE2 e SKTI apresentaram as maiores porcentagens de inibição variando de 55% até 80%, enquanto GORE1 inibiu em média 30%. Além disso, o efeito de inibição se manteve similar durante os 12 dias, mostrando que são estáveis à temperatura ambiente. Após 12h de exposição das lagartas ao inibidor o peptídeo GORE2 apresentou, nas maiores concentrações, valores de inibição próximos a 60% das tripsinas, enquanto GORE1 e SKTI apresentaram aproximadamente 40% a partir da concentração de 0,06 p/v. CONCLUSAO: Os peptídeos GORE1 e GORE2 não perderam estabilidade e mantiveram sua atividade inibitória por mais tempo do que o SKTI, provavelmente devido ao seu tamanho. Além disso, o peptídeo GORE2 apresentou uma porcentagem de inibição maior que GORE2 e SKTI demonstrando enorme potencial inibitório. |