Resumo |
Microrganismos endofíticos habitam o interior de plantas, estabelecendo interações que podem induzir alterações no metabolismo do hospedeiro. O fungo Pochonia chlamydosporia destaca-se pela alta eficiência no controle de fitonematoides e por promover o crescimento. Têm sido observadas, também, alterações na expressão gênica da planta na presença do fungo. No presente estudo, perfis de LC/MS de folhas e raízes foram analisados para verificar alterações no metabolismo de tomateiro após a infestação por P. chlamydosporia. Foram avaliadas as alterações de metabólitos nas raízes e os efeitos sistêmicos dessa interação em folhas, além das mudanças fitohormonais nas raízes. Clamidósporos de P. chlamydosporia (C-10) foram inoculados em 3 mudas por vaso de tomateiro Santa Clara (por 21 dias). Como controle foram utilizadas plantas sem inoculação. Depois de 24 e 44 dias do transplantio, ou dias após a infecção (DAI), raízes e folhas foram coletadas e armazenadas em freezer -80 ºC. Amostras de 100 mg do material vegetal foram processadas para extração de metabólitos e analisadas por cromatografia líquida acoplada ao espectrômetro de massas Q-tof (UHPLC/MS) para obtenção dos perfis de metabólitos; e por UHPLC MS QqQ para obtenção dos perfis de fitohormônios. Os perfis de LC/MS foram alinhados pelo algoritmo XCMS e exportados para análises estatísticas pela plataforma MetaboAnalyst. Íons apresentando diferenças significativas (>1.5 para Fold-Change e p-valor<0,05) entre os tratamentos foram selecionados e submetidos à identificação utilizando-se a biblioteca de espectros NIST. Alterações nos perfis de íons nas raízes foram mais expressivas aos 24 DAI (883 íons detectados e 175 desregulados), o que corresponde à fase de estabelecimento do endofitismo, em comparação com 44 DAI (409 íons detectados e 20 desregulados). Maiores alterações foram verificadas para o íon identificado como tomatidina, um glicoalcalóide que possui ação antifúngica, e sua menor abundância pode estar relacionada como um mecanismo para permitir a colonização endofítica. Além do mais, essa interação ocasionou mudanças sistêmicas, visto que foram observadas alterações nos perfis de LC/MS das folhas na presença do fungo colonizando as raízes (107 e 155 íons desregulados para 24 e 44 DAI, respectivamente). Além da tomatidina, alguns ácidos graxos e lipídeos de cadeia longa com alterações de abundâncias foram identificados nas folhas em resposta a infestação, tais como a 2-Monolinoleína e octadecenamida. Não foram observadas alterações para os fitohormônios ACC, SA e ABA. O ácido jasmônico (JA) está relacionado com a defesa de plantas contra patógenos e para 24 dias verificou-se uma redução dos níveis de JA na presença do fungo. Portanto, conclui-se que para o estabelecimento de P.chamydosporia como endofítico, o metabolismo da planta foi alterado nos estágios iniciais para suprimir as defesas da planta. |