Resumo |
O desenvolvimento vegetal é prejudicado por eventos ambientais que são ocasionados por estresses de origem biótica e/ou abiótica. No entanto, sabe-se que as plantas, assim como os demais organismos vivos, desenvolvem processos adaptativos fundamentados em mecanismos que visam aumentar a tolerância aos diversos tipos de estresse sofridos. Esses mecanismos ocorrem por meio de vias de sinalização celular, que são responsáveis por perceber o sinal de estresse e propagá-lo em uma resposta que pode culminar na alteração da expressão de genes alvo específicos e, assim promover a adaptação da célula a uma nova condição. Uma importante via de sinalização exclusiva de plantas converge os sinais de estresse no retículo endoplasmático e de estresse osmótico prolongado para a indução sinérgica das proteínas N-Rich (NRP), desencadeadoras de uma via de morte celular. O aumento da expressão de NRPs induz a expressão dos genes GmNAC081 e GmNAC30 que interagem para promover a expressão de VPE (Vacuolar Processing Enzyme), uma proteína efetora do processo de morte celular. Esta via foi caracterizada em soja, sendo conservada entre as espécies vegetais. Entretanto, diante da dificuldade de se aprofundar os estudos dos mecanismos em plantas agronomicamente cultiváveis se faz necessária a utilização de organismos modelo, como Arabidopsis thaliana, que apresentam ferramentas biológicas acessíveis a serem exploradas. Para isso, inicialmente é preciso identificar os genes ortólogos da via de sinalização em Arabidopsis. O ortólogo de GmNAC081 em Arabidopsis é o ANAC036, no entanto não se conhece o ortólogo de GmNAC30. Predições de bioinformática indicam ATAF2 como o mais provável ortólogo de GmNAC30 em Arabidopsis. O presente trabalho teve como objetivo avaliar possíveis interações entre ATAF2 e ANAC036. Para isso, foram realizados ensaios de interação entre as referidas proteínas in vitro por meio da técnica de duplo-híbrido e, em seguida, in vivo por meio do ensaio de complementação de fluorescência bimolecular (BiFC). Os resultados de duplo híbrido demonstram que ATAF2 interage especificamente com ANAC036, não se observando interações com os controles negativos. A formação do complexo ATAF2:ANAC036 foi comprovada in vivo por BiFC, porém em um número reduzido de células. Estes resultados confirmam que ATAF2 é o provável ortólogo de GmNAC30 na via de morte celular mediada por NRP/DCD. Ensaios de complementação de função estão sendo conduzidos para validar esta interpretação. |