“Inteligência Artificial: A Nova Fronteira da Ciência Brasileira”
19 a 24 de outubro de 2020
Trabalho 13379
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CNPq, Outros |
| Primeiro autor | Igor Barbosa Rocha Ribas |
| Orientador | GABRIELA PICCOLO MAITAN ALFENAS |
| Título | Produção e purificação parcial de endoglucanase do fungo Kretzschmaria Zonata |
| Resumo | As enzimas são catalisadores das reações nos sistemas biológicos. A celulose é um polissacarídeo linear que compõe a parede celular das células vegetais, constituído por unidades de D-glicose unidas por ligações glicosídicas (β1→4). As celulases, enzimas que hidrolisam a celulose, são divididas em três grupos: endoglucanases, exoglucanases e β-glicosidases. Endoglucanases hidrolisam ligações internas, agindo mais especificamente na região amorfa da celulose. Elas iniciam o processo de degradação com a clivagem das ligações β-1,4 no centro da molécula e liberam oligossacarídeos. O objetivo deste projeto foi induzir a produção de endoglucanases pelo fungo Kretzschmaria zonata, da família Xylariaceae, utilizando diferentes fontes de carbono e purificar parcialmente uma das enzimas obtidas. Após o preparo do pré-inóculo para ativação do K. zonata, o fungo foi cultivado por 8 dias a 28 ºC, sem agitação, em meios semi-sólidos para a obtenção dos extratos brutos. As fontes de carbono testadas foram: café verde, capim elefante, sabugo de milho, farelo de trigo e bagaço de cana-de-açúcar. Para a realização das extrações enzimáticas foi usado o tampão acetato de sódio, 50 mM, pH 5,0 e agitação de 150 rpm por 60 minutos em temperatura ambiente. Após a filtração, realizada com filtro de nylon, as partes líquidas foram submetidas à centrifugação a 15.000 rpm por 10 minutos, à 4 ºC, e os sobrenadantes, denominados extratos brutos, foram armazenados sob refrigeração para posteriores análises. Para análise da atividade de endoglucanase nos extratos brutos foi utilizado o substrato carboximetilcelulose 1,25% (m/v) e o método do ácido 3,5-dinitrosalicílico. A determinação de proteínas foi realizada pelo método de Bradford. Após o cálculo das atividades específicas de cada extrato, o extrato bruto obtido a partir do capim elefante foi o escolhido para o processo de purificação parcial, pois este foi o que apresentou a maior atividade enzimática para endoglucanase, de 3,06 U/mL, e uma expressiva atividade específica, de 3,66 U/mg. O método de purificação utilizado foi a precipitação com sulfato de amônio e, após testes com diferentes concentrações do sal, a porcentagem de sal escolhida para ser aplicada no extrato foi 80 % (equivalente a 2,58 g de sal para 5 mL de extrato), por ser a que apresentou a precipitação mais eficaz. A enzima de interesse se concentrou toda no precipitado, não havendo atividade enzimática no sobrenadante. O método do ácido bicinconínico foi utilizado para quantificação de proteínas após a precipitação. Notou-se um aumento da atividade específica do extrato bruto, que era de 3,62 U/mg, para o extrato parcialmente purificado, que apresentou 5,65 U/mg, o que comprova a eficácia desse processo de purificação. Conclui-se que o fungo K. zonata tem potencial para produção de endoglucanases, enzimas importantes em diferentes aplicações biotecnológicas. |
| Palavras-chave | biomassa lignocelulósica, enzima, purificação |
| Forma de apresentação..... | Painel |
| Link para apresentação | Painel |
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