Das Montanhas de Minas ao Oceano: Os Caminhos da Ciência para um Futuro Sustentável
20 a 25 de outubro de 2025
Trabalho 20404
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Pós-graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Dimensões Ambientais: ODS12 |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | FAPEMIG |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Camila Aparecida Martins |
| Orientador | LUCIANO GOMES FIETTO |
| Outros membros | Thays Vieira Bueno |
| Título | Expressão heteróloga de um efetor de Phakopsora pachyrhizi em Komagataella phaffii |
| Resumo | A ferrugem asiática da soja é uma das doenças mais severas dessa cultura, levando a diminuição de produtividade e perdas econômicas significativas. Causada pelo fungo biotrófico Phakopsora pachyrhizi, a ferrugem da soja tem chamado a atenção pelo seu alto poder de disseminação, alta variabilidade do fungo, adaptação e resistência, mesmo com a utilização de métodos de controle disponíveis. Sabe-se que fungos que exibem um padrão de infecção mais bem-sucedido, conseguem ocasionar uma suscetibilidade por efetores, formando estruturas chamadas haustórios, onde são secretadas proteínas importantes para a sobrevivência e nutrição do fungo na planta hospedeira. É sabido que esses efetores são proteínas pequenas, ricas em ligações de sulfeto entre resíduos de cisteína, podendo suprimir o sistema de defesa vegetal promovendo a instalação e sobrevivência do patógeno na planta. Neste sentido, o presente estudo tem como objetivo a expressão heteróloga do efetor 3939 (Phapa-7431740) de P. pachyrhizi em sistema de levedura para estudos de estrutura e de interação com proteínas da planta. Para isso, foi alinhada uma sequência do transcrito de_novo_3939 com o genoma de referência de P. pachyrhizi disponível no JGI (genoma MT2006), utilizando o programa BLASTx. A sequência de interesse foi analisada, sendo verificada a presença de um peptídeo sinal na região N-terminal (25 aa), o qual foi removido para a utilização do sinal de secreção do α-factor do plasmídeo pPICZαA. Posteriormente, a sequência foi otimizada e o gene de interesse clonado no vetor pPICZαA, contendo marcador de seleção à zeocina, utilizando os sítios de restrição EcoRI e NotI. O gene de interesse foi sintetizado pela empresa GenOne e clonado em Escherichia coli DH5α para transformação na cepa Komagataella phaffii KM71 e expressão induzida por metanol. A proteína de estudo será purificada por cromatografia de afinidade, utilizando a TAG de histidina e realizado uma eletroforese em gel SDS-PAGE para análise do perfil de expressão e confirmação do peso molecular. Resultados da predição mostraram que a sequência codificadora da proteína apresenta 308 bp, possuindo 121 aminoácidos e peso molecular estimado de 12,66 kDa. Observou-se também a presença de 11 resíduos de cisteínas (9%), além de um motivo FxC e domínio EGF com capacidade de ligação ao cálcio. Estudos posteriores poderão contribuir para a expressão de outros efetores associados a este fungo, utilizando o sistema de expressão heteróloga de leveduras, contribuindo para os estudos de efetores de fungos fitopatogênicos. |
| Palavras-chave | Expressão heteróloga, ferrugem asiática, biotecnologia. |
| Forma de apresentação..... | Painel |
| Link para apresentação | Painel |
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