Resumo |
A antracnose é uma doença que acomete o feijoeiro-comum (Phaseolus vulgaris L.) causada pelo fungo hemibiotrófico Colletotrichum lindemuthianum. Durante a interação com o hospedeiro, esse fungo produz enzimas responsáveis por degradar o tecido vegetal. O gene creA codifica uma proteína reguladora que atua na repressão catabólica do carbono em fungos filamentosos. A proteína CreA controla a expressão de genes envolvidos na degradação da parede celular vegetal. Entretanto, não se sabe ainda a importância do gene creA em C. lindemuthianum. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi identificar no genoma de C. lindemuthianum e caracterizar o gene creA. O gene creA de Aspergillus nídulans foi utilizado para busca no genoma sequenciado do fungo C. lindemuthianum A2 2-3 da raça 89 (MASP00000000.2.) Foi realizada a identificação dos cis-elementos presentes na região promotora em 1.200 pb (pares de bases) acima do códon de iniciação da tradução por meio de busca manual das sequências de reconhecimento de diferentes proteínas reguladoras. A sequência de aminoácidos de CreA foi comparada com a sequência de aminoácidos de proteínas ortólogas de outros 48 fungos, obtidas no banco de dados do NCBI (National Center for Biotechnology Information) e alinhadas utilizando a ferramenta online Clustal Omega. Uma árvore filogenética foi construída utilizando o software MEGA 5.0. Foi realizada a análise da expressão diferencial do gene creA por qPCR nas diferentes fases da interação C. lindemthianum-feijoeiro (penetração, fase biotrófica e fase necrotrófica) e em meio mínimo com 2 % de glicose. A sequência codificadora putativa do gene creA possui 1221 pb e a proteína deduzida apresenta 406 aminoácidos. Não foram identificados íntrons. A análise da região promotora revelou alguns cis-elementos putativos e sítios de ligação a fatores de transcrição relacionados a regulação de creA. A proteína CreA de C. lindemuthianum apresentou alta identidade com proteínas ortólogas de outras espécies de Colletotrichum, como Colletotrichum orbiculare (98,44%), Colletotrichum spinosun (98,03%) e Colletotrichum trifolie (97,78%). Foi possível observar na análise filogenética que todos os fungos do gênero Colletotrichum estão em um único grupo, pois apresentam os aminoácidos altamente conservados. Nos demais grupos, fungos de espécies do mesmo gênero também apresentaram esse padrão de conservação. Foram detectados transcritos do gene creA em todas as fases de desenvolvimento do fungo na planta, mas houve expressão diferencial significativa quando o fungo foi cultivado em meio mínimo contendo 2% de glicose, que é uma condição de repressão de genes que codificam proteínas envolvidas no catabolismo de fontes de carbono mais complexas. A análise do gene creA auxiliará na compreensão da regulação da repressão catabólica do carbono em C. lindemuthianum e a sua relação com a patogenicidade |