Resumo |
O setor sucroenergético contribui de forma significativa para o PIB brasileiro, tornando a cana-de-açúcar uma cultura de grande importância para o país. Dentre as inúmeras doenças que atacam a cana, o raquitismo-das-soqueiras, causado pela bactéria Leifsonia xyli subsp. xyli, é uma doença de difícil identificação e com ausência de sintomas visíveis. Ela pode causar sérios danos sem ser percebida, com prejuízos que podem superar um milhão de dólares. Desta forma, o presente trabalho tem como objetivo avaliar o desempenho da técnica Nested-PCR (nPCR) para detecção de Leifsonia xyli subsp. xyli em mudas de cana-de-açúcar para a obtenção de um método de diagnóstico sensível e específico. Para a extração do DNA genômico, foram coletados e macerados colmos de três genótipos, UFV062066, CB49-260 e RB867515, tratados termicamente e que apresentavam sintomas de escaldadura-das-folhas, doença causada por outra bactéria, Xanthomonas albilineans. Para a validação e otimização da PCR (Reação em cadeia da polimerase), foram realizadas análises das condições ideais para as reações seguindo as recomendações do fabricante (Agilent®). Esse processo foi feito inicialmente para os pares de primers externos (CxyliF – CxyliR) e, em seguida, com o produto da primeira reação diluído 1/10, para os internos (NCxyliF e NCxyliR). Para visualização dos resultados, foram feitos géis tanto de poliacrilamida, quanto de agarose, com os quais verificou-se formação de banda apenas para a amostra do genótipo UFV062066 para todas as temperaturas testadas. A reação com os primers externos apresentou um fragmento nítido com 520bp a 58,4º C, enquanto a reação com os primers internos apresentou um fragmento com 229bp a 59,6º C. Com os resultados obtidos, a nPCR demostrou ser uma técnica eficaz e específica na detecção do patógeno. Foi possível constatar que os primers analisados nesse estudo amplificaram apenas o DNA da Leifsonia xyli subsp. xyli, não havendo amplificação do DNA da cana-de-açúcar. Estudos prospectivos serão realizados com um número maior de genótipos da cana-de-açúcar com o intuito de validação do método nPCR. |