"A Transversalidade da Ciência, Tecnologia e Inovações para o Planeta"
5 a 7 de outubro de 2021
Trabalho 15734
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Biologia geral |
| Setor | Departamento de Biologia Animal |
| Bolsa | CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CNPq |
| Primeiro autor | Aline Leão de Andrade Bandeira de Melo |
| Orientador | REGGIANI VILELA GONCALVES |
| Outros membros | LEANDRO LICURSI DE OLIVEIRA, Mariáurea Matias Sarandy Souza, OSWALDO PINTO RIBEIRO FILHO, Raul Santos Alves |
| Título | Atividade proliferativa in vitro de frações do extrato da pele de rã-touro (Lithobates catesbeianus) hidrolisado por tripsina |
| Resumo | Introdução: Muitos compostos extraídos da pele de anfíbios têm demonstrado efeitos proliferativos, antioxidantes e antimicrobianos. Objetivos: O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito proliferativo de frações obtidas da hidrólise enzimática por tripsina da pele de rã-touro. Materiais e Métodos: Os animais foram pesados, eutanasiados e as peles foram separadas e submetidas a lavagem em solução fisiológica estéril (solução de NaCl a 0,9%, previamente resfriada a 4°C), sendo então armazenadas em freezer -80°C até posterior utilização. Todos os procedimentos para a obtenção das amostras de pele foram aprovados pela Comissão de Ética no Uso de Animais da UFV (registro nº 834/2018). O extrato hidrolisado foi obtido utilizando a enzima tripsina na proporção 1/100 de enzima/substrato (p/p), sendo 1% de enzima e substrato misturados e incubados por um período de 8 horas em temperatura controlada e agitação constante. Posteriormente, a mistura foi aquecida até a fervura por um período de 10 minutos para inativação enzimática. O extrato hidrolisado foi liofilizado e armazenado em freezer -80°C até posterior utilização. O fracionamento do extrato foi realizado pelo método de fracionamento por estado sólido, sendo 10 mg do extrato hidrolisado diluído em 1 mL de água destilada e centrifugado durante 10 minutos a 10.000 rpm. O sobrenadante foi coletado e injetado em uma coluna hidrofílica. A eluição foi realizada utilizando um gradiente de 0 a 85% de 0,1% de ácido trifluoroacético em acetonitrila, sendo obtidas 10 frações. Foi coletado 2 mL de cada fração, congelado e liofilizado. Células de macrófagos RAW 264.7 foram cultivadas em placas de 96 poços a uma densidade de 2x104 células/poço em 200 μL de meio de cultura Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) suplementado com 10% de soro fetal bovino, em estufa a 37°C e 5% de CO2. Após um período de 24 horas de incubação, o sobrenadante foi substituído pelos compostos fracionados solubilizados em meio de cultura, e a incubação continuou pelas próximas 22 horas. O controle (100% de crescimento) foram células cultivadas apenas em meio de cultura. Após este período de incubação, retirou-se 50 μL do sobrenadante e adicionou 50 μL de solução de brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio (MTT) (0,5 mg/mL) a cada poço, e as células foram incubadas novamente na estufa por um período de 2 horas. Após este período, 90 μL do sobrenadante foi retirado e 100 μL de dimetilsulfóxido (DMSO) foram adicionados aos poços. A absorbância foi lida em um Leitor de Microplaca Elisa Multiskan™ FC Microplate Photometer (Thermo Scientific™) ajustado para 570 nm. Resultados: Os resultados mais expressivos em relação a proliferação celular foram obtidos das frações F4 e F6. Observou-se também compostos com atividade citotóxica nas frações F2, F9 e F10. Conclusão: As frações F4 e F6 do extrato da pele de rã-touro, hidrolisado com tripsina, estimulam a proliferação de macrófagos RAW 264.7. |
| Palavras-chave | Palavras-chave: peptídeos, proteínas, hidrólise enzimática. |
| Forma de apresentação..... | Painel |
| Link para apresentação | Painel |
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