"A Transversalidade da Ciência, Tecnologia e Inovações para o Planeta"

5 a 7 de outubro de 2021

Trabalho 15734

ISSN 2237-9045
Instituição Universidade Federal de Viçosa
Nível Graduação
Modalidade Pesquisa
Área de conhecimento Ciências Biológicas e da Saúde
Área temática Biologia geral
Setor Departamento de Biologia Animal
Bolsa CNPq
Conclusão de bolsa Sim
Apoio financeiro CNPq
Primeiro autor Aline Leão de Andrade Bandeira de Melo
Orientador REGGIANI VILELA GONCALVES
Outros membros LEANDRO LICURSI DE OLIVEIRA, Mariáurea Matias Sarandy Souza, OSWALDO PINTO RIBEIRO FILHO, Raul Santos Alves
Título Atividade proliferativa in vitro de frações do extrato da pele de rã-touro (Lithobates catesbeianus) hidrolisado por tripsina
Resumo Introdução: Muitos compostos extraídos da pele de anfíbios têm demonstrado efeitos proliferativos, antioxidantes e antimicrobianos. Objetivos: O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito proliferativo de frações obtidas da hidrólise enzimática por tripsina da pele de rã-touro. Materiais e Métodos: Os animais foram pesados, eutanasiados e as peles foram separadas e submetidas a lavagem em solução fisiológica estéril (solução de NaCl a 0,9%, previamente resfriada a 4°C), sendo então armazenadas em freezer -80°C até posterior utilização. Todos os procedimentos para a obtenção das amostras de pele foram aprovados pela Comissão de Ética no Uso de Animais da UFV (registro nº 834/2018). O extrato hidrolisado foi obtido utilizando a enzima tripsina na proporção 1/100 de enzima/substrato (p/p), sendo 1% de enzima e substrato misturados e incubados por um período de 8 horas em temperatura controlada e agitação constante. Posteriormente, a mistura foi aquecida até a fervura por um período de 10 minutos para inativação enzimática. O extrato hidrolisado foi liofilizado e armazenado em freezer -80°C até posterior utilização. O fracionamento do extrato foi realizado pelo método de fracionamento por estado sólido, sendo 10 mg do extrato hidrolisado diluído em 1 mL de água destilada e centrifugado durante 10 minutos a 10.000 rpm. O sobrenadante foi coletado e injetado em uma coluna hidrofílica. A eluição foi realizada utilizando um gradiente de 0 a 85% de 0,1% de ácido trifluoroacético em acetonitrila, sendo obtidas 10 frações. Foi coletado 2 mL de cada fração, congelado e liofilizado. Células de macrófagos RAW 264.7 foram cultivadas em placas de 96 poços a uma densidade de 2x104 células/poço em 200 μL de meio de cultura Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) suplementado com 10% de soro fetal bovino, em estufa a 37°C e 5% de CO2. Após um período de 24 horas de incubação, o sobrenadante foi substituído pelos compostos fracionados solubilizados em meio de cultura, e a incubação continuou pelas próximas 22 horas. O controle (100% de crescimento) foram células cultivadas apenas em meio de cultura. Após este período de incubação, retirou-se 50 μL do sobrenadante e adicionou 50 μL de solução de brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio (MTT) (0,5 mg/mL) a cada poço, e as células foram incubadas novamente na estufa por um período de 2 horas. Após este período, 90 μL do sobrenadante foi retirado e 100 μL de dimetilsulfóxido (DMSO) foram adicionados aos poços. A absorbância foi lida em um Leitor de Microplaca Elisa Multiskan™ FC Microplate Photometer (Thermo Scientific™) ajustado para 570 nm. Resultados: Os resultados mais expressivos em relação a proliferação celular foram obtidos das frações F4 e F6. Observou-se também compostos com atividade citotóxica nas frações F2, F9 e F10. Conclusão: As frações F4 e F6 do extrato da pele de rã-touro, hidrolisado com tripsina, estimulam a proliferação de macrófagos RAW 264.7.
Palavras-chave Palavras-chave: peptídeos, proteínas, hidrólise enzimática.
Forma de apresentação..... Painel
Link para apresentação Painel
Gerado em 0,66 segundos.