"A Transversalidade da Ciência, Tecnologia e Inovações para o Planeta"
5 a 7 de outubro de 2021
Trabalho 15704
| ISSN | 2237-9045 |
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| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CNPq |
| Primeiro autor | João Victor Badaró de Moraes |
| Orientador | JULIANA LOPES RANGEL FIETTO |
| Outros membros | GUSTAVO COSTA BRESSAN, Nancy da Rocha Torres Pavione, RAPHAEL DE SOUZA VASCONCELLOS |
| Título | AVALIAÇÃO DA INIBIÇÃO DA NTPDASE-2 DE Leishmania (Viannia) braziliensis COMO POTENCIAL ALVO NO TRATAMENTO PARA LEISHMANIOSE TEGUMENTAR |
| Resumo | A leishmaniose tegumentar é uma doença que afeta milhões de pessoas em todo mundo e pode levar ao surgimento de lesões desfigurantes que impactam a qualidade de vida, constituindo um problema de saúde pública. Leishmania (Viannia) braziliensis é o principal agente causador da leishmaniose tegumentar no Brasil. NTPDases têm sido sugeridas como fatores de virulência em Leishmania e diversos estudos apontam essas enzimas como potenciais alvos para novos fármacos no tratamento das leishmanioses. Recentemente, nosso grupo de pesquisa descobriu 4 moléculas capazes de inibir a NTPDase-1 de Trypanosoma cruzi e de inibir a infecção de L. braziliensis in vitro, no entanto, o efeito destes compostos não havia sido testado na enzima recombinante do parasito. O objetivo deste trabalho consistiu em expressar e purificar a NTPDase2 recombinante de Leishmania braziliensis, avaliar o potencial de inibição destes compostos sobre a atividade enzimática e analisar a natureza da interação proteína-inibidor por docking molecular. A construção obtida comercialmente foi utilizada para transformar células de E. coli BL21(DE3) RIL competentes para expressão. O pré-inóculo foi crescido na presença de antibiótico, inoculado em meio LB e crescido a 37 ºC, 180 rpm até DO600 entre 0,6 e 0,8. A indução foi feita com 0,2 mM de IPTG por 2 horas e avaliada por SDS-PAGE e western blotting. A proteína purificada foi dosada por Bradford, renaturada em tampão de renaturação a 4 ºC e a atividade enzimática foi avaliada na ausência e na presença dos compostos (à 100 micromolar), substrato UDP a 2.5 mM e após 48 horas. A atividade enzimática foi medida pelo método colorimétrico para determinação de fosfato inorgânico (Pi) utilizando verde malaquita. Para as análises bioinformáticas a estrutura tridimensional da proteína foi obtida via modelagem molecular pelo progama I-TASSER e otimizada utilizando o programa YASSARA. A estrutura tridimensional dos compostos foi construída e otimizada utilizando o software Avogadro. Os ensaios de docking foram realizados utilizando o AutoDock Vina. Nossos resultados mostram que a proteína está presente em maior quantidade nos corpos de inclusão. Dos compostos testados o IL-09 e o IL-05 apresentaram maior inibição da atividade, 92,88% e 88,41%, respectivamente. IL-06 mostrou inibição de 23,86%. Nas análises de ancoramento molecular vimos que os compostos com melhor performance na inibição tiveram menor energia de interação na região do sitio ativo da enzima, indicando uma inibição competitiva. Os resultados obtidos sugerem que IL-09 e IL-05 possuem alta capacidade de inibir a atividade da rLbNTPDase2 e reafirmam o potencial farmacológico dessas moléculas. Como perspectiva pretendemos aprofundar o estudo da interação proteína-inibidor utilizando simulações de dinâmica molecular, comprovar o tipo de inibição e determinar Ki e IC50 dos compostos experimentalmente. |
| Palavras-chave | LbNTPDase2, inibidor, Leishmaniose |
| Forma de apresentação..... | Vídeo |
| Link para apresentação | Vídeo |
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