"A Transversalidade da Ciência, Tecnologia e Inovações para o Planeta"
5 a 7 de outubro de 2021
Trabalho 15434
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Exatas e Tecnológicas |
| Área temática | Ciência e tecnologia de alimentos |
| Setor | Departamento de Tecnologia de Alimentos |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Jeniffer Martins Silva |
| Orientador | MONIQUE RENON ELLER |
| Outros membros | Laís Silva Batalha, LEANDRO LICURSI DE OLIVEIRA, Roberto Souza Dias, SERGIO OLIVEIRA DE PAULA |
| Título | Imunoensaio de fluxo lateral para detecção de bacteriófagos específicos para Streptococcus thermophilus |
| Resumo | A bactéria produtora de ácido láctico (BAL) Streptococcus thermophilus tem sido amplamente estudada em função da alta demanda por seus produtos de fermentação. Entretanto, a infecção dessa espécie por bacteriófagos pode culminar em falhas na fermentação, comprometendo assim a qualidade e rendimento do produto. A detecção precoce desses bacteriófagos possibilita a adoção de medidas que assegurem a qualidade do produto e, consequentemente, minimiza a ocorrência de perdas financeiras relacionadas a falhas no processo fermentativo. Esse estudo visou a produção de um ensaio imunocromatográfico de fluxo lateral (LFA) para a detecção desses bacteriófagos em leite. Para isso, os bacteriófagos foram propagados com o uso da técnica de dupla camada em ágar. A suspensão fágica obtida foi purifica por ultracentrifugação com gradiente de cloreto de césio, pela qual foram obtidas seis frações protéicas e com atividade lítica sobre a bactéria. As frações foram individualmente utilizadas para imunização de camundongos de linhagem BALB/c objetivando a produção de anticorpos policlonais anti-fago. As frações de soro coletadas ao fim da etapa de imunização foram avaliadas quanto a presença de anticorpos anti-fago e anti-bactéria com o uso da técnica de DOT BLOT. Para minimizar a presença de anticorpos anti-bactéria, as frações foram incubadas com sedimentados de células bacterianas. O soro purificado contendo os anticorpos foi utilizado para a montagem de um ensaio de fluxo lateral. Incialmente os anticorpos foram conjugados com nanoparticulas de ouro coloidal (AuNP) para formar as moléculas de captura. Após a montagem do sistema de sobreposição de membranas de compõem o LFA, as suspensões contendo os anticorpos foram utilizadas para impregnação das fitas. A suspensão contendo o complexo anticorpo policlonal anti-fago/AuNP foi utilizada na membrana de fibra de vidro, a solução de anticorpos anti-fago foi utilizada na linha de teste e a solução de anticorpo anti-IgG de camundongo na linha de controle, ambas impregnadas na membrana de nitrocelulose. Apesar de comprovada a eficácia do protocolo de conjugação do AuNP, o conjugado não apresentou uma boa fluidez ao longo da membrana de nitrocelulose. O tamanho do conjugado anticorpo anti-fago/AuNP foi avaliado com o uso do equipamento Malvern Zetasizer Nano-ZS, e foi constatado que o diâmetro encontrado de 67,14 nm estava compatível com as especificações da membrana. Visando a otimização do ensaio para padronização do teste, serão adotadas estratégias envolvendo a utilização de detergentes, surfactantes, outros modelos de membranas de nitrocelulose e alterações no pH das soluções. |
| Palavras-chave | Biosensor, AuNP-IgG, Policlonal |
| Forma de apresentação..... | Vídeo |
| Link para apresentação | Vídeo |
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