"A Transversalidade da Ciência, Tecnologia e Inovações para o Planeta"
5 a 7 de outubro de 2021
Trabalho 15409
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Microbiologia |
| Setor | Departamento de Biologia Geral |
| Bolsa | CNPq |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CNPq |
| Primeiro autor | Maria Regina Fonseca Ramos |
| Orientador | SERGIO OLIVEIRA DE PAULA |
| Outros membros | Ana Cláudia Alvarenga Carneiro, Camilla Garcia Regis Leite, John Willians Oliveira Prates, Vanessa Pecini da Cunha |
| Título | Clonagem e expressão da proteína spike do SARS-CoV-2 visando uma candidata vacinal contra a COVID-19 |
| Resumo | A pandemia de COVID-19 se originou em dezembro de 2019, na província de Wuhan, na China. Estima-se que tenha vitimado, até julho de 2021, mais de 4 milhões de pessoas a nível mundial e infectado em torno de 190 milhões. Apenas em solo brasileiro, os números já são superiores a 540.000 óbitos. Diante dessa problemática, a mobilização da comunidade científica internacional e a injeção de capital sem precedentes voltada à mitigação dessa doença determinaram o desenvolvimento de vacinas de forma acelerada e segura. O foco desses imunizantes, tendo em vista seu potencial imunogênico e papel fundamental na infecção, é a proteína spike de SARS-CoV-2. Enquanto principal alvo dos anticorpos neutralizantes, a glicoproteína S é responsável pelo reconhecimento dos receptores ACE2 nas células humanas e pela decorrente fusão, sendo uma das quatro proteínas componentes do capsídeo viral. Assim, este trabalho objetiva a produção de um antígeno vacinal a partir da expressão heteróloga dessa proteína em Pichia pastoris KM71H, sistema que se destaca pelos baixos custos e alto rendimento envolvidos. Para tal, foi realizada a transformação de bactérias Escherichia coli Top10F competentes, cultivadas em meio LB acrescido de zeocina (25µg/ml), para fins de replicação plasmidial. Em seguida, a inserção por choque térmico do plasmídeo pPICZαA_S_CV19 foi confirmada via PCR, gerando um amplicon de 322 pb. Para inserção em eucarioto, o DNA plasmidial sofreu linearização por meio da enzima de restrição SacI. Posteriormente, células de P. pastoris foram crescidas em meio YPD (zeocina 100µg/ml) e, após eletrocompetência, transformadas por eletroporação. A amplificação por PCR ratificou o sucesso da clonagem. Colocam-se aqui como perspectivas do projeto os experimentos com a levedura transformada induzida com metanol, o qual servirá como única fonte de carbono devido ao promotor AOX inserido em seu gene. A expressão e a secreção da proteína spike, após confirmação por Western blotting, possibilitarão a avaliação imunogênica desse antígeno, que se impõe como potencial estratégia para o desenvolvimento de uma vacina em plataforma integralmente brasileira. |
| Palavras-chave | COVID-19, proteína spike, Pichia pastoris |
| Forma de apresentação..... | Painel |
| Link para apresentação | Painel |
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