"A Transversalidade da Ciência, Tecnologia e Inovações para o Planeta"

5 a 7 de outubro de 2021

Trabalho 15371

ISSN 2237-9045
Instituição Universidade Federal de Viçosa
Nível Pós-graduação
Modalidade Pesquisa
Área de conhecimento Ciências Biológicas e da Saúde
Área temática Microbiologia
Setor Departamento de Microbiologia
Bolsa CNPq
Conclusão de bolsa Não
Apoio financeiro CNPq
Primeiro autor Anderson Antonio Silva
Orientador MARCOS ROGERIO TOTOLA
Outros membros ALEX GAZOLLA DE CASTRO, Michelle Fernandes Almeida
Título Produção e caracterização do biossurfactante lipopeptídeo produzido por Bacillus subtilis LBBMA RI4914
Resumo Os lipopeptídeos são uma classe de biossurfactantes produzidos por bactérias do gênero Bacillus, sendo os mais comuns a surfactina, a fengicina e a iturina. Tais moléculas são anfipáticas e possuem propriedades antimicrobianas e potencial para aplicação nas áreas médica, farmacêutica, agrícola, ambiental, alimentícia e de cosméticos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a produção de biossurfactante pelo isolado Bacillus subtilis LBBMA RI4914 e caracterizar as famílias de lipopeptídeos produzidas. Para isso, o isolado foi reativado em meio TSA (Difco™ Tryptic Soy Agar), e a placa foi incubada overnight, a 30 °C. Uma colônia foi transferida para um tubo contendo 7 mL de TSB (Difco™ Tryptic Soy Broth) e incubada sob agitação de 200 rpm, a 30 °C, por 18 horas. Em seguida, uma alíquota da cultura foi transferida para um Erlenmeyer de 250 mL com 70 mL de meio mineral (contendo glicose e nitrato de sódio como fontes de carbono e nitrogênio, respectivamente), de modo a se obter uma densidade óptica a 600 nm (D.O.600nm) igual a 0,05. O frasco foi incubado sob agitação de 200 rpm, a 30 °C, por 96 horas. O crescimento da cultura foi monitorado por meio de leituras da D.O.600nm e a produção de biossurfactante foi avaliada por meio do teste de espalhamento de óleo em placa. O cultivo foi realizado em triplicata. Para recuperação do biossurfactante, o sobrenadante das culturas foi submetido à precipitação ácida, pelo ajuste do pH para 2,0, seguida de liofilização. Os extratos brutos obtidos foram submetidos à extração sólido-líquido, utilizando-se metanol, para a obtenção do biossurfactante semi-purificado. A presença dos lipopeptídeos surfactina, fengicina e iturina nos extratos metanólicos foi avaliada por Cromatografia Líquida de Ultra Eficiência acoplada à Espectrometria de Massas (UPLC-MS). Os compostos foram identificados com base em seus tempos de retenção e massas em comparação com os padrões comerciais adquiridos da Sigma-Aldrich. O analisador de massas operou no modo ESI, positivo, e a detecção das isoformas dos lipopeptídeos foi realizada pelo modo SIM (Monitoramento de Íons Selecionados). Por meio do teste de espalhamento de óleo foi observado que a produção de biossurfactante ocorre desde o início do cultivo, ainda na fase lag de crescimento, e alcança seu máximo em 72 horas, momento em que as células atingem a fase estacionária. Nos cromatogramas obtidos pela análise por UPLC-MS não foram observados picos correspondentes às iturinas e fengicinas. No entanto, foram identificados íons com razões m/z equivalentes ao padrão de surfactina. Pode-se concluir que a produção de biossurfactante por B. subtilis LBBMA RI4914 está associada ao crescimento populacional e que este isolado produz apenas a família das surfactinas. A produção de apenas uma das famílias é interessante do ponto de vista biotecnológico, uma vez que facilita o processo de recuperação da molécula de interesse e, consequentemente, sua aplicação industrial.
Palavras-chave Biotecnologia, Bioprospecção, Espectrometria de massas
Forma de apresentação..... Vídeo
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