"A Transversalidade da Ciência, Tecnologia e Inovações para o Planeta"
5 a 7 de outubro de 2021
Trabalho 15250
| ISSN | 2237-9045 |
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| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | CNPq |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG, Outros |
| Primeiro autor | Luana Maria Pacheco Schittino |
| Orientador | TIAGO ANTONIO DE OLIVEIRA MENDES |
| Outros membros | Gabriele Lopes Knop, Jacqueline Araújo Fiuza, Renato Lima Senra |
| Título | Expressão heteróloga do Fator VII de coagulação sanguínea em Leishmania tarentolae |
| Resumo | A glicoproteína conhecida como Fator VII ou proconvertina, encontra-se entre os fatores de coagulação dependentes da vitamina K que circulam na forma de zimogênio no plasma sanguíneo. O Fator VII é uma das moléculas precursoras da série de reações químicas ocorrentes na cascata de coagulação sanguínea e sua deficiência ou mau funcionamento pode acarretar em doenças raras como a hemofilia, que de acordo com o Ministério da Saúde atinge cerca de 12 mil brasileiros (censo de 2018). A produção industrial de glicoproteínas é um mercado crescente e, de modo geral, influenciada pelas limitações que os organismos utilizados nesse processo apresentam. O Fator VII de coagulação sanguínea enquadra-se neste caso, visto que é uma proteína majoritariamente produzida em células de mamíferos, devido à importância e necessidade da glicosilação, porém, esse sistema de expressão apresenta baixo rendimento e alto custo de produção. Por ser uma proteína poli-glicosilada, algumas funções do Fator VII podem ser comprometidas se esse for produzido em organismos que não realizam modificações pós-traducionais, como bactérias, apesar do seu conhecido potencial industrial de baixo custo. Sendo assim, o objetivo do projeto é expressar essa glicoproteína em Leishmania tarentolae UFV-1, um protozoário não patogênico e geneticamente otimizado pelo nosso grupo de pesquisa para expressão de proteínas com um padrão de glicosilação semelhante ao de humanos. Inicialmente, a sequência do gene correspondente à proteína Fator VII humana foi recuperada do banco de dados Uniprot e submetida a otimização de códons para o gênero Leishmania pela plataforma online “IDT códon optimization”. O gene otimizado foi sintetizado comercialmente em vetor de expressão bacteriano, pET28-a. Além disso, foram feitos os desenhos e síntese química dos primers específicos para que o gene seja inserido por enzimas de restrição no vetor de expressão pLEXSY em leishmania. Em seguida, fez-se a transformação bacteriana para a inserção do vetor contendo o gene sintético da proteína Fator VII em E.coli, que foi confirmada através de reação em cadeia de polimerase (PCR). Após a confirmação da transformação, foi induzida a expressão por IPTG para posterior confirmação da expressão proteica por SDS-PAGE e Western-Blot. Em paralelo, fez-se a clonagem do gene em vetor pGEM-T Easy e após digestão, realizou-se a clonagem em vetor de expressão em leishmania para a transfecção e expressão da proteína em L.tarentolae. Por resultados, espera-se que a proteína produzida e purificada em bactéria não apresente glicosilação e seja funcionalmente inferior à produzida e purificada em leishmania. O protozoário tripanossomatídeo em questão pode ser, em geral, de fácil adaptação à produção industrial em grande escala. Sabendo disso, a principal expectativa é de que aumentando o volume de expressão de proteínas funcionalmente otimizadas, torne-se possível a diminuição de custos de medicamentos baseados em glicoproteínas. |
| Palavras-chave | leishmania, L.tarentolae, glicoproteína |
| Forma de apresentação..... | Painel |
| Link para apresentação | Painel |
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