Resumo |
Introdução-LIMYB (L10-Interacting Myb Domain-Containing Protein), uma proteína nuclear que possui dois domínios MYB/SANT-like pertencente à familia MYB, participa da via de defesa antiviral mediada por NIK1 (NSP-interacting kinases) em plantas contra Begomovirus. NIK1 é um receptor de membrana que pertence superfamília de RLK (receptor-like kinase). NIK1 foi descoberto por interagir com a proteína viral nuclear shuttle protein (NSP) o que impede uma resposta efetiva contra a infecção viral. NIK1 é responsável pela sinalização do sistema imune antiviral de planta, sendo ativada por meio da percepção de elicitores virais promovendo homodimerização ou heterodimerização deste receptor, e subsequente fosforilação no resíduo de treonina na posição 474. Os elicitores de NIK1 já caracterizados sao PAMPs virais, ácidos nucleicos de begomoviruses, e PAMPs antibacterianas, como a flagelina bacteriana (Flg 22). A ativação de NIK1 desencadeia uma cascata de fosforilação resultando na fosforilação da PROTEÍNA RIBOSSOMAL L10 (RPL10) que, como consequência, direciona-se para o núcleo. No núcleo, L10 interage com LIMYB, que se liga aos promotores e reprime a expressão de genes da maquinaria de tradução, levando à supressão global da tradução. O mRNA viral não é eficientemente traduzido, comprometendo a infecção. Devido a sua importância na via de NIK1, estudos da função biológica de LIMYB podem contribuir significativamente para estudos de imunidade e desenvolvimento em plantas. Por exemplo, não se sabe se LIMYB tem de ser ativada por fosforilação para reprimir a expressão de genes de tradução Objetivo- investigar quais os estresses bióticos e abióticos induzem a fosforilação de LIMYB. Métodos A análise da indução da fosforilação de LIMYB por ácidos nucleicos de begomovirus e flagelina bacteriana (Flg22) foi realizada por ensaio in vivo com plantas Arabidopsis thaliana limyb Salk_032054 (nocautes), linhagens overxpressando LIMYB e plantas selvagens. As sementes foram plaqueadas separadamente em placas de petri contendo meio MS 1/2 força. As plântulas foram cultivadas a 22℃ por 12 dias, e aclimatadas por um dia em água, e consequentemente induzidas a tratamentos, utilizando separadamente DNA e RNA extraídos de plantas infectadas por begomovirus e não infectadas e Flg 22, em concentração de 250 ng/µL, por um período de 3 horas. Foi realizada a extração da proteína e análise por western blot. Resultados- LIMYB é fosforilada por diferentes estímulos, tanto por ácidos nucleicos como por flg22. Conclusão- Os estudos realizados com LIMYB indicam sua participação em processos de proteção contra estresses bióticos e estudos estão em progressos para analisar se estímulos abióticos causam fosforilação de LIMYB, conforme o padrão de ativação de NIK1. |