"A Transversalidade da Ciência, Tecnologia e Inovações para o Planeta"
5 a 7 de outubro de 2021
Trabalho 14965
| ISSN | 2237-9045 |
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| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Biologia geral |
| Setor | Departamento de Biologia Geral |
| Bolsa | CNPq |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CNPq |
| Primeiro autor | Camilla Garcia Regis Leite |
| Orientador | SERGIO OLIVEIRA DE PAULA |
| Outros membros | Ana Cláudia Alvarenga Carneiro, Luciana de Souza Fernandes, Maria Clara Nogueira Pereira, Vanessa Pecini da Cunha |
| Título | Transformação, expressão e purificação da proteína spike (S) do SARS CoV-2 |
| Resumo | A pandemia de Covid-19 teve início no final de 2019 em Wuhan na China e até julho de 2021 resultou na morte de mais de 4 milhões de pessoas em todo o mundo. Esta doença é causada pelo vírus SARS CoV-2 que resulta em uma síndrome respiratória aguda grave e possui como principais sintomas febre, tosse seca e cansaço. Assim, é de extrema urgência que sejam direcionadas pesquisas com o intuito de produção de vacinas e kits diagnósticos para esta doença. Muitos trabalhos são focados na proteína spike (S) do vírus, uma proteína estrutural e com duas subunidades, a S1 que está associada à capacidade do SARS Cov-2 de reconhecer sua célula hospedeira e ancorar no alvo, e a S2 que tem a função de auxiliar na fusão do vírus com a membrana da célula. Visando a produção da proteína S para eventuais kits diagnósticos, este trabalho teve como objetivo a expressão e a purificação da proteína S. Inicialmente, foi realizada a transformação em E. coli (linhagem SHuffle) com o plasmídeo pET29a/S pelo método de choque térmico e as colônias transformantes foram confirmadas por meio de PCR de colônia. Em seguida, foi feita a indução da expressão da proteína S com IPTG (Isopropil β-d-tiogalactopiranosídeo) em concentrações de 0,25 mM e 0,5 mM por 24 horas. A seguir, o sobrenadante da amostra foi coletado como fração solúvel e corpo de inclusão, e depois purificado por cromatografia de afinidade utilizando a coluna His Trap Chelating carregada com níquel acoplada ao aparelho de cromatografia líquida de proteína rápida (FPLC). Após a purificação, parte do volume da amostra foi precipitado com ácido tricloroacético (TCA) para sua aplicação em um SDS-PAGE que separa as proteínas por peso molecular, e logo depois foi feito um Western Blotting que detecta a proteína de interesse com um anticorpo específico. A expressão da proteína S em E.coli (SHuffle) foi confirmada e foi observado que a concentração de 0,5 mM de IPTG resultava em uma maior concentração da proteína. Também foi possível observar, a partir da técnica de Western Blotting, uma banda acima de 220 KDa que é o tamanho esperado da proteína S. Portanto, a obtenção desta proteína para kits diagnósticos de baixo custo é necessária para torná-los mais acessíveis à população em geral que não possui condições para custeá-los, o que facilita o rastreio de casos positivos de Covid-19 no mundo. Além disso, mais estudos são necessários para estabelecer a padronização da produção da proteína S purificada em larga escala em biorreatores. |
| Palavras-chave | SARS CoV-2, proteína spike, expressão. |
| Forma de apresentação..... | Painel |
| Link para apresentação | Painel |
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