Resumo |
Diversas espécies do gênero Penicillium apresentam características de interesse industrial e agrícola, seja pela produção de metabólitos secundários ou devido à capacidade de promoção de crescimento vegetal e controle de fitopatógenos. Assim, a identificação de micro-organismos promissores e de novas moléculas bioativas são de interesse para a geração de novos produtos. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial antagônico de diferentes espécies de Penicillium endofíticas de seringueiras da floresta amazônica brasileira (estados do Acre e do Amazonas) a fitopatógenos e a transformação genética de dois isolados promissores com o gene que codifica a proteína vermelha fluorescente (RFP). Para o teste de antagonismo em cultura pareada foram utilizados 28 isolados de Penicillium spp. endofíticos e cinco fitopatógenos (Fusarium oxysporum, Fusarium verticillioides, Colletotrichum lindemuthianum, Sclerotinia sclerotiorum e Rhizoctonia solani). Um disco de micélio de 0,5 cm do fungo endofítico foi posicionado a 1 cm da borda da placa de Petri contendo meio BDA (Ágar Batata Dextrose) e o mesmo aplicou-se ao fitopatógeno, que foi colocado no lado oposto da placa. Como controle foram colocados nas placas com BDA apenas os fungos fitopatogênicos. O potencial antagonista foi avaliado por meio da medição da área de crescimento micelial de cada fungo fitopatogênico pelo software QUANT V.1.0, após cada fitopatógeno cobrir toda a superfície do meio nas placas do controle. A porcentagem de inibição (I%= [Ac-At/ Ac] x 100) foi calculada, sendo Ac a área média do crescimento micelial do fitopatógeno nas placas do controle e At a área média do crescimento micelial do fitopatógeno nas placas do tratamento. Dois isolados endofíticos que apresentaram maior porcentagem de inibição foram selecionados e transformados com o plasmídeo pPGW-HpH-RFP (confere resistência a higromicina e a produção de RFP). Os transformantes foram selecionados em meio BDA contendo 200 μg de higromicina. Todos os outros 26 isolados inibiram pelo menos um dos fitopatógenos. Os isolados selecionados no ensaio de cultura pareada foram: (I) Isolado 211F7F_AC com inibição de 24% para S. sclerotiorum, 7% para R. solani, 20% para F. oxysporum e 36% para F. verticillioides; (II) Isolado 641F18F_AC com inibição de 17% para S. sclerotiorum, 10% para R. solani, 29% para F. oxysporum e 33% para F. verticillioides. Foram obtidos dois transformantes para o isolado 641F18F_AC e 11 transformantes para o isolado 211F7F_AC. A expressão de RFP foi observada em todas as colônias transformadas. Os ensaios in vitro demonstraram o potencial dos metabólitos produzidos pelos isolados endofíticos da seringueira para o controle dos fitopatógenos. Ensaios in vivo serão realizados para confirmar a inibição dos fitopatógenos por Penicillium spp., avaliar a promoção do crescimento vegetal e a colonização da planta pelos isolados selecionados que expressam RFP. |