Fome e Abundância: Um Paradoxo Brasileiro?
17 a 22 de outubro de 2016
Trabalho 6907
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Agrárias |
| Área temática | Biologia e manejo de doenças e pragas de plantas |
| Setor | Departamento de Fitopatologia |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | FAPEMIG |
| Primeiro autor | Gabriela Machado Ribeiro |
| Orientador | CLAUDINE MARCIA CARVALHO |
| Outros membros | Murilo Siqueira Alves, Silvia Leão de Carvalho, Tarsiane Mara Carneiro Barbosa |
| Título | Determinação da localização subcelular da proteína p15 do Cowpea mild mottle vírus e estudo do seu papel no estabelecimento da infecção viral |
| Resumo | A necrose da haste da soja, uma doença causada pelo Cowpea mild mottle virus (CPMMV), é uma necrose sistêmica que vem provocando muitas perdas devido a sua agressividade e velocidade de dispersão. Essa doença causa morte das plantas infectadas, podendo levar a perda de até 85% das plantas em campos de soja com cultivares suscetíveis. Considerando a importância da soja para o agronegócio brasileiro, é de extrema importância um maior conhecimento sobre o agente etiológico da necrose da haste. O CPMMV pertence ao gênero Carlavirus, família Betaflexiviridae. O genoma viral apresenta seis fases abertas de leitura (‘Open Reading frames’ - ORFs). A ORF1 atua na replicação viral. As ORFs 2, 3 e 4 codificam proteínas envolvidas no movimento, a ORF5 codifica a proteína do capsídeo. A ORF6 codifica uma proteína rica em cisteína, denominada p15, com função indefinida. O objetivo deste trabalho foi determinar a localização subcelular da proteína p15 e analisar seu papel no estabelecimento da infecção do CPMMV em soja. Para o ensaio de localização subcelular, a p15 foi clonada nos vetores de expressão, pK7FWG2 e pK7WFG2, fusionados a GFP na porção C- e N-terminal, respectivamente . Em seguida, células de Agrobacterium tumefaciens (GV3101) foram transformadas com as construções, agroinfiltradas em plantas de Nicotiana bentamiana e posteriormente visualizadas em microscopio confocal. Também foi verificada a influencia da p15 na expressão de diferentes genes envolvidos nas vias de defesa da planta, através de PCR quantitativo em tempo real (RT-qPCR) em protoplastos de soja eletroporados na presença ou ausência da p15. Foram avaliados os genes MAPKKα, MEK2, MAPK3, WRKY3, WRKY8, WRKY25, WRKY29, MKS1, CDPK5, SNC1, EDS1, VIP1, SUMM2 e RBOHB. Os genes Actina e β-Tubulina foram utilizados como controles endógenos. A construção pK7WFG2-p15 apresenta localização nuclear; já a construção pK7FWG2-p15 apresentou forte marcação no núcleo e nucléolo e, além disso, foi observada uma associação com cloroplastos. A posição da fusão interfere na localização subcelular da proteína p15. As análises de RT-qPCR revelaram que os genes MSK1 e SUMM2 foram up regulados na presença da p15, já os genes //CDPKS, EDS1 e SNC1 //foram down regulados. A expressão dos demais genes não foi afetada pela presença da p15. O fato da ORF6 se localizar no núcleo, juntamente com a alteração da expressão de certos genes de defesa, nos leva a concluir que esta proteína possui um importante papel na suplantação das respostas de defesa da planta. |
| Palavras-chave | Cowpea mild mottle virus , localização subcelular, RT-qPCR |
| Forma de apresentação..... | Painel |