Fome e Abundância: Um Paradoxo Brasileiro?
17 a 22 de outubro de 2016
Trabalho 6509
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Agrárias |
| Área temática | Genética e Melhoramento Vegetal |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | FAPEMIG |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Danyelle Barbosa Mayrink |
| Orientador | MAXIMILLER DAL BIANCO LAMAS COSTA |
| Outros membros | Júlia Coelho Condé, Luiz Cláudio Costa Silva, NEWTON DENIZ PIOVESAN, Rafael Delmond Bueno |
| Título | Clonagem molecular dos genes GmFAD2-1A e GmFAD2-1B de soja Glycine max |
| Resumo | A soja ocupa o primeiro lugar entre as leguminosas cultivadas no mundo, e é utilizada em larga escala na produção de óleo vegetal, biodiesel, ração animal e suplemento alimentar para veicular a maioria dos aminoácidos essenciais. O cultivo da soja corresponde a cerca de 55,2% da área plantada em grãos no Brasil, sendo responsável por aproximadamente um terço da produção mundial. Cerca de 20% do grão de soja é constituído de óleo, sendo composto principalmente por: ácido palmítico (16:0) – 13%, ácido esteárico (18:0) – 4%, ácido oleico (18:1 Δ9) – 18%, ácido linoleico (18:2 Δ9,12) – 55% e ácido linolênico (18:3 Δ9,12,15) – 10%. A adição de uma insaturação na cadeia carbônica do ácido oleico converte-o em ácido linoleico, reação catalisada pela enzima ω-6-dessaturase, codificada pelos genes GmFAD2-1A e GmFAD2-1B, expressos principalmente em sementes em desenvolvimento. O presente trabalho teve por objetivo a clonagem molecular dos genes GmFAD2-1A e GmFAD2-1B. Foram utilizados os acessos CS303TNKCA com baixo teor de ácido linolênico, PI 603452 mutante para o gene GmFAD2-1A, PI 283327 mutante para o gene GmFAD2-1B, ambos apresentando alto teor de ácido oleico, e as linhas PL04, PL21, PL79 e PL126 mutantes para os dois genes, obtidas a partir do cruzamento entre PI 603452 e PI 28332. Um conjunto de primers foi desenhado visando amplificar ambos os genes. Foi extraído o RNA total dos sete acessos e a partir desses procedeu-se a síntese de cDNA para a amplificação das sequências codificadoras dos genes. A PCR (Polymerase Chain Reaction) foi realizada com os cDNA dos respectivos indivíduos e o produto da reação submetido a eletroforese em gel de agarose a 1,2%, que em seguida foi purificado com kit de purificação de PCR PureLink® (Invitrogen). Após purificação, os fragmentos obtidos foram digeridos com as enzimas de restrição BamHI e XhoI e em seguida ligados ao plasmídeo pYES2, utilizando enzima T4 Ligase. Células competentes da cepa DH5α da bactéria Escherichia coli foram transformadas, plaqueadas e incubadas a 37ºC para a multiplicação do plasmídeo. Após 12h, foram retiradas colônias isoladas da placa e colocadas para crescimento em meio LB líquido, incubadas a 37ºC/180RPM por 12h, e após incubação foi realizada a extração do DNA plasmidial. Para confirmar a existência do inserto, o DNA plasmidial obtido foi digerido com as mesmas enzimas de restrição e novamente submetidos a gel de agarose, em que se obtém duas bandas correspondentes ao plasmídeo e ao fragmento clonado. Até o presente momento foram obtidos 7 clones, sendo dois para o genótipo PI 603452, três para PL21, um para PL04 e um para PL79. As próximas etapas do trabalho visam sequenciar os genes clonados e multiplicados pela E. coli e posteriormente proceder a transformação da cepa W303 de Saccharomyces cerevisiae para análise de atividade enzimática dos genes. |
| Palavras-chave | biodiesel, E. coli, Saccharomyces cerevisiae |
| Forma de apresentação..... | Painel |