Fome e Abundância: Um Paradoxo Brasileiro?
17 a 22 de outubro de 2016
Trabalho 6421
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Genética e Melhoramento Vegetal |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Júlia Coelho Condé |
| Orientador | MAXIMILLER DAL BIANCO LAMAS COSTA |
| Outros membros | Luiz Cláudio Costa Silva, NEWTON DENIZ PIOVESAN, Rafael Delmond Bueno, Raíssa Gomes de Andrade |
| Título | Clonagem do gene GmFAD3A mutante da variedade CS303TNKCA |
| Resumo | O Brasil é atualmente o segundo maior produtor de soja (Glycine max (L.) Merrill) do mundo, ficando atrás apenas dos EUA. Esta cultura é de extrema importância para a agricultura brasileira, pois representa aproximadamente 55,2% de toda área plantada do país. Além disso, a soja recebe grande destaque pela diversidade na utilização de seus produtos, como o óleo e o farelo proteico, usados, por exemplo, na produção de biodiesel e na indústria alimentícia. O óleo proveniente das sementes da soja apresenta em sua composição: 13% de ácido palmítico (16:0); 4% de ácido esteárico (18:0); 18% ácido oleico (18:1 Δ9); 55% de ácido linoleico (18:2 Δ9,12) e 10% de ácido linolênico (18:3 Δ9,12,15). A presença de ácidos graxos poliinsaturados confere baixa estabilidade oxidativa ao óleo de soja, portanto a redução dos teores de ácido linolênico nos grãos da soja é um dos focos do Programa de Melhoramento da Qualidade da Soja do BIOAGRO/UFV, pois assim diminui-se sua instabilidade oxidativa. A conversão de ácido linoleico em ácido linolênico é catalisada pelas enzimas da família ω-3-dessaturases, codificadas pelos genes FAD3 (GmFAD3A, GmFAD3B e GmFAD3C), e mutações conhecidas em GmFAD3A são capazes de reduzir o teores de ácido linolênico presente no óleo de soja. O objetivo desse trabalho foi clonar o gene GmFAD3A mutante proveniente da variedade de soja CS303TNKCA, que apresenta baixo teor de ácido linolênico. A partir do RNA total extraído das sementes em estágio R5 de desenvolvimento, foi feita a síntese de cDNA, seguida pela amplificação por PCR (Polymerase Chain Reaction), usando um conjunto de primers específicos previamente desenhados. O fragmento foi submetido à eletroforese para confirmação da amplificação do fragmento de interesse com 624 pb e então purificado. A digestão do fragmento e do vetor pYES2 foi realizada com as enzimas de restrição BamHI e XhoI, que não possuem atividade estrela. A clonagem do gene foi feita através da reação de ligação com a enzima T4 DNA ligase. Com o gene clonado no vetor de interesse, células competentes de Escherichia coli da cepa DH5α foram transformadas por choque térmico e em seguida plaqueadas em meio LB sólido na presença de ampicilina. A partir de colônias selecionadas foi feita a extração de DNA plasmidial e sua digestão com as mesmas enzimas de restrição, para a confirmação da clonagem por eletroforese, em que se analisou a presença de um fragmento com 624 pb. Até o momento obteve-se um total de três clones que apresentam o inserto proveniente da variedade CS303TNKCA. As perspectivas são que após o sequenciamento desses produtos e confirmação de que o gene foi corretamente inserido no vetor, sejam feitas novas transformações em cepas W303 de Saccharomyces cerevisiae para a análise da atividade enzimática conferida pelo gene GmFAD3A. |
| Palavras-chave | óleo de soja, ácido linolênico, dessaturase |
| Forma de apresentação..... | Painel |