Fome e Abundância: Um Paradoxo Brasileiro?
17 a 22 de outubro de 2016
Trabalho 6420
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Ensino médio |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Genética e melhoramento vegetal |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Raíssa Gomes de Andrade |
| Orientador | MAXIMILLER DAL BIANCO LAMAS COSTA |
| Outros membros | Danyelle Barbosa Mayrink, Luiz Cláudio Costa Silva, NEWTON DENIZ PIOVESAN, Rafael Delmond Bueno |
| Título | Clonagem da ômega-6 dessaturase (GmFAD2-1A) em acessos de soja diferindo no conteúdo de ácido oleico |
| Resumo | O óleo de soja (Glycine max (L.) Merr.) é um dos mais importantes produtos da soja, sendo o mesmo composto por ácido palmítico (16:0) 11%; ácido esteárico (18:0) 4%; ácido oleico (18:1) 25%; ácido linoleico (18:2) 52%; e ácido linolênico (18:3) 8%. Visando aumentar a estabilidade oxidativa do óleo de soja, a indústria alimentícia tem utilizado a hidrogenação química para reduzir as concentrações de ácido linoléico e ácido linolênico e aumentar a concentração de ácido oléico. Este processo gera quantidades significativas de ácidos graxos saturados e de isômeros trans de ácidos graxos. O consumo desses compostos parcialmente hidrogenado está diretamente relacionado com a incidência de certas doenças cardíacas, altos níveis de colesterol e riscos de desenvolvimento de diabetes tipo 2. Os genes GmFAD2-1A e GmFAD2-1B presentes na soja codificam uma família de enzimas ômega-6 dessaturase responsável por converter ácido oleico em ácido linoleico, sendo considerados importantes no controle do nível de ácido oleico na semente de soja. O gene GmFAD2-1A mutado do acesso PI603452 apresenta a deleção de uma adenina, gerando um stop códon prematuro e consequentemente uma proteína truncada não funcional que está associada a um alto teor de ácido oleico. O objetivo deste trabalho foi clonar o gene GmFAD2-1A de indivíduos com alto teor de ácido oleico. Inicialmente foi realizada a extração de RNA de sementes de soja no estágio R5 nas linhas PI603452, PL04, PL126, PL21 e PL 79. O RNA obtido foi tratado com DNase e posteriormente utilizado para a realização da síntese do cDNA. Utilizamos conjuntos de primers desenhados especificamente para região codificante do gene GmFAD2-1A para amplificação via PCR. A eletroforese em gel de agarose 1,2% foi realizada para confirmar a amplificação e, logo após, foi realizada a purificação do produto do PCR diretamente do gel. Posteriormente, foram executadas a digestão do vetor pYES2 e do fragmento obtido utilizando as enzimas de restrição XhoI e BamHI. A clonagem foi conduzida a partir da reação de ligação usando a enzima T4 ligase e os produtos digeridos obtidos. Foi feita a transformação por choque térmico utilizando células competentes da cepa DH5α de Escherichia coli e, em seguida, foi realizado o plaqueamento das mesmas em meio LB sólido contendo amplicilina. Colônias isoladas crescidas nas placas de petri foram escolhidas e colocadas para crescimento a 37ºC em meio Luria-Bertani líquido. A partir delas foi realizada uma extração de DNA plasmidial e, logo após, uma digestão para análise dos fragmentos obtidos e confirmação da clonagem. Até o momento foram identificados clones para todos os indivíduos, e estes foram enviados para sequenciamento e, após confirmação, serão utilizados para transformação na cepa W303 de Saccharomyces cerevisiae com a finalidade de avaliar a atividade da enzima codificada pelo gene GmFAD2-1A. |
| Palavras-chave | Gene, Ácido oleico, Clones |
| Forma de apresentação..... | Painel |