Fome e Abundância: Um Paradoxo Brasileiro?
17 a 22 de outubro de 2016
Trabalho 6350
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Farmacologia e bioquímica |
| Setor | Departamento de Biologia Geral |
| Bolsa | CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Amanda Patrícia Gonçalves |
| Orientador | ANESIA APARECIDA DOS SANTOS |
| Outros membros | ELIZABETH PACHECO BATISTA FONTES |
| Título | Clonagem, obtenção e purificação das proteínas NIK1 e BAK1 em sistema heterólogo de expressão. |
| Resumo | Proteínas cinases (PK) estão envolvidas em inúmeros processos celulares em plantas e metazoários, onde atuam na transdução de sinais que culminam em processos de crescimento e desenvolvimento. Em Arabidopsis thaliana, existem cerca de 600 genes que codificam receptores cinase sendo a maioria destes do tipo serina/treonina. A proteína NIK 1 (“NSP-Interacting Kinase”) é membro da família LRR-RLK (“leucine-rich repeat receptor like kinase”) e foi identificada por meio da interação de seu domínio cinase com a proteína de movimento núcleo-citoplasma NSP (“nuclear shuttle protein”) de geminivírus que bloqueia a resposta de defesa antiviral. Ensaios demonstraram que NIK apresenta capacidade de transfosforilação e fosforilação de substratos “in vitro” e “in vivo” e que a substituição do resíduo aminoacídico Thr-474 para ácido aspártico torna o mutante constitutivamente ativado com capacidade de fosforilação do substrato aumentada, diminui a inibição causada pela proteína NSP e eleva a translocação da proteína RPL10 ("Ribosomal Protein L10") para o núcleo. No núcleo, RPL10 forma complexo com o fator transcricional LIMYB (“L-10 Interacting MYB domain-containing protein”) que suprime a expressão de genes que codificam proteínas ribossomais culminando na inibição da síntese proteica e tolerância a geminivírus. Por outro lado, a proteína BAK1 (“Brassinosteroid Insensível 1-associated Kinase”) também membro da família LRR-RLK, é considerada o regulador geral na imunidade inata de plantas contra bactérias através da associação com outros receptores. Entretanto, resultados prévios indicam que NIK1 regula negativamente a resposta de defesa contra bactérias. Assim, com a finalidade de elucidar os mecanismos de ativação e transfosforilação da proteína NIK na cascata de sinalização de defesa antiviral e sua possível interação com a proteína BAK1, os objetivos deste trabalho foram obter construções com dupla mutação em resíduos conservados no loop de ativação de NIK, por meio de mutagênese sítio-dirigida e recombinação em vetor de expressão em bactéria, induzir e purificar por cromatografia de afinidade a proteína mutante, bem como obter a construção da proteína BAK1 truncada em sua porção carboxi-terminal em vetor de expressão em bactéria, expressar e purifica-la por cromatografia de afinidade para a utilização das mesmas em experimentos de fosforilação “in vitro”. |
| Palavras-chave | NIK1, BAK1, Proteínas cinases |
| Forma de apresentação..... | Oral, Painel |