Fome e Abundância: Um Paradoxo Brasileiro?
17 a 22 de outubro de 2016
Trabalho 6187
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Microbiologia |
| Setor | Departamento de Microbiologia |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Ana Carolina Nery Teixeira |
| Orientador | DENISE MARA SOARES BAZZOLLI |
| Outros membros | MATEUS FERREIRA SANTANA |
| Título | Desenvolvimento da técnica denominada CAP CRISPR Amplification Polymorphism para análise de variabilidade genética em Actinobacillus pleuropneumoniae |
| Resumo | O sistema CRISPR-Cas (Clustered Regularly Interespaced Short Palindromic Repeats associated to Cas proteins) é considerado um sistema imune adaptativo encontrado em bactérias e arqueias. O sistema CRISPR-Cas está organizado em loci constituídos por um ou mais operons que contêm genes que codificam as proteínas Cas e o locus CRISPR propriamente dito, que possui regiões com sequências repetidas espaçadas por sequências provenientes de elementos genéticos móveis (plasmídeos, bacteriófagos e transposons). Neste trabalho, foram analisados 12 genomas de linhagens referências correspondentes a 12 sorotipos de Actinobacillus pleuropneumoniae e 7 genomas de isolados clínicos pertencentes ao sorotipo 8 desta mesma espécie, disponíveis no banco de dados GenBank da plataforma NCBI. O sistema CRISPR-Cas encontrado mostrou-se conservado entre todos os genomas das linhagens analisadas, diferindo apenas no tamanho do locus CRISPR encontrado entre as linhagens sequenciadas. Essa variação reflete um número diferente de aquisições de DNA exógeno por cada linhagem. Para se avaliar a possibilidade de utilização do locus CRISPR para análise de variabilidade genética de A. pleuropneumoniae, foram construídos oligonucleotídeos específicos baseados no locus CRISPR, na qual um deles se anela no interior das sequências repetidas presentes no locus CRISPR e o outro oligonucleotídeo que compõe o par se anela na região 5’ do primeiro gene localizado downstream ao locus. A partir desses oligonucleotídeos foi proposta uma reação de PCR. Os produtos da reação de PCR foram submetidos à eletroforese em gel de agarose 1,2% e o padrão de bandas obtido foi analisado com auxílio do programa Bionumerics versão 6.0 e um dendrograma foi obtido pelo método UPGMA (Unweighted Pair Group Method with Arithmetic mean). A técnica proposta pela primeira vez e denominada CAP foi capaz de discriminar as linhagens bacterianas analisadas, gerando polimorfismos genéticos e, isolados clínicos pertencentes ao mesmo sorotipo, como o 8 foram agrupados no mesmo clado filogenético, o que confirma os resultados obtidos pelas análises in silico, que mostraram considerável identidade entre os loci CRISPR destes isolados. Portanto, a técnica desenvolvida por nosso grupo apresentou poder discriminatório e pode ser utilizado em estudos de análise de variabilidade genética de populações de A. pleuropneumoniae. Apoio financeiro: FAPEMIG, CNPq e CAPES/PROEX. |
| Palavras-chave | CRISPR, Actinobacillus pleuropneumoniae, variabilidade genética |
| Forma de apresentação..... | Painel |