Fome e Abundância: Um Paradoxo Brasileiro?
17 a 22 de outubro de 2016
Trabalho 6178
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Farmacologia e bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | FAPEMIG |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | FAPEMIG |
| Primeiro autor | Luciana de Souza Fernandes |
| Orientador | GUSTAVO COSTA BRESSAN |
| Outros membros | Geniana da Silva Gomes, Maria Roméria da Silva |
| Título | Clonagem, expressão e purificação da proteína reguladora de actina Swiprosin-1 |
| Resumo | A migração celular destaca-se como um importante processo em diferentes fenômenos biológicos, tais como embriogênese, resposta inflamatória e progressão tumoral. Swiprosin-1 é uma proteína envolvida na regulação do acesso de cofilina aos filamentos de F-actina. A estrutura de swiprosin-1 inclui o domínio EF-hand no qual íons Ca2+ se ligam, e regiões desordenadas na extremidade N-terminal, seguidas por potenciais domínios de ligação SH3. Esta proteína é encontrada em protrusões da membrana do tipo microvilo e lamelipódios e está diretamente ligada à reorganização do citoesqueleto, processo que permite a migração celular para outros tecidos. Em câncer, essa característica se mostra elevada e relaciona-se intimamente ao processo de metástase. A atividade de swiprosin-1 é dependente de seu estado de fosforilação e pode ser induzida por EGF (fator de crescimento epidermal). Quando não fosforilada e na presença de Ca2+, swiprosin-1 reduz a acessibilidade de cofilina à F-actina, impedindo que ocorra a despolimerização dos filamentos de actina. A superexpressão de swiprosin-1 aumenta a formação de lamelipódios e espalhamento celular, enquanto o knockdown mostra redução no espalhamento e na migração celular. Esta proteína é encontrada superexpressa em tumores como melanomas e, visando prosseguir em estudos funcionais e estruturais, os objetivos deste trabalho compreenderam a sua clonagem, expressão e purificação. Para a realização deste trabalho, a clonagem foi realizada em um vetor de expressão de sistema procarioto. Em seguida, foram realizados os testes de expressão com a cepa BL21 variando-se o tempo e concentrações de IPTG. Por último, a purificação da fração solúvel foi feita usando a coluna de afinidade HisTrap Chelating carregada com níquel acoplada ao sistema FPLC. Obtivemos como resultado a Swiprosin-1 fusionada à cauda de histidina clonada no vetor de expressão pET28a e expressa em cepa BL21. Observamos que a proteína foi expressa satisfatoriamente na indução por duas horas numa concentração de 0,1 mM de IPTG. Após a purificação, a presença da swiprosin-1 foi confirmada por SDS-PAGE e sua concentração de 6,275 mg/mL foi determinada por absorvância a 280 nm. Portanto a obtenção de swiprosin-1 purificada permitirá melhor compreender a relação estrutura-função em melanoma metastático e outros tipos de câncer. |
| Palavras-chave | Câncer, Swiprosin-1, actina |
| Forma de apresentação..... | Painel |