Fome e Abundância: Um Paradoxo Brasileiro?
17 a 22 de outubro de 2016
Trabalho 6177
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Farmacologia e bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CNPq |
| Primeiro autor | Isadora Cunha Ribeiro |
| Orientador | JULIANA LOPES RANGEL FIETTO |
| Outros membros | Christiane Mariotini Moura, GUSTAVO COSTA BRESSAN, MARCIA ROGERIA DE ALMEIDA LAMEGO |
| Título | Busca por Inibidores da NTPDase-1 de Trypanosoma cruzi Como Estratégia no Desenho Racional de Novas Drogas para o Tratamento da Doença de Chagas |
| Resumo | A Doença de Chagas é causada por Trypanosoma cruzi e figura como uma das 13 principais doenças tropicais negligenciadas no mundo. Essa doença ainda permanece como um grave problema de saúde pública, com uma estimativa de 6 a 7 milhões de infectados no mundo. T. cruzi possui em sua superfície uma ectonucleotidase denominada NTPDase-1 (TcNTPDase-1). As ectonucleotidases da família E-NTPDases são enzimas capazes de hidrolisar nucleotídeos tri e/ou difosfatados, que podem ser degradados a nucleosídeos por outras ectonucleotidases. Os nucleotídeos extracelulares atuam como sinalizadores em vários processos celulares, como modulação da resposta imune de hospedeiros mamíferos. A hidrólise de ATP extracelular possui papel na infectividade e virulência de T. cruzi, bem como para outros parasitos, como Leishmania, Trichomonas, Toxoplasma, Entamoeba e outros. Por isso, as NTPDases são consideradas um alvo em potencial para o desenho racional de novas drogas alvo específicas. A NTPDase-1 de T. cruzi já foi mostrada como fator de infecciosidade e virulência do parasito. Este trabalho teve como objetivo a buscar por inibidores da TcNTPDase-1. Para isso, avaliamos a atividade nucleotidásica da proteína recombinante produzida em sistema bacteriano frente a diferentes compostos e extratos naturais. Buscou-se também, a padronização e expressão da NTPDase-1 na sua forma nativa, para aprimoramento de estudos funcionais e estruturais. A atividade enzimática foi medida pela dosagem de ortofosfato livre através do método colorimétrico do Verde Malaquita. Para realização desta etapa, utilizamos a proteína recombinante purificada e renaturada a partir de corpos de inclusão. Os compostos selecionados para os ensaios de inibição estavam classificados em dois grupos: extratos vegetais e de micro-organismo, e compostos sintéticos. Para a padronização da expressão da TcNTPDase-1 em sua forma nativa foram feitos testes de indução, onde variou-se a temperatura, tempo e meio de cultivo. A purificação foi feita em três etapas cromatográficas, afinidade – troca iônica – afinidade, todos em sistema automatizado tipo FPLC. Utilizou-se SDS-PAGE para a avaliação da expressão e purificação da proteína de interesse. A partir dos dados das atividades enzimáticas da TcNTPDase-1 recombinante, foram identificados, entre os extratos vegetais, alguns compostos com atividade inibitória, sendo dois com inibição total, o BCFE e o BCFEA. Os compostos isolados desses extratos também foram testados e alguns obtiveram bons resultados, sendo que um deles, o CIII-L, demonstrou atividade inibitória total. Além destes, também foram testados outros compostos comerciais e compostos sintéticos. A expressão da TcNTPDase-1 em fração solúvel foi possível a baixa temperatura e em meio mais pobre, as etapas cromatográficas utilizadas foram capazes de recuperar a proteína alvo com um alto grau de pureza. |
| Palavras-chave | Trypanosoma cruzi, E-NTPDases, Inibidores. |
| Forma de apresentação..... | Oral |