Fome e Abundância: Um Paradoxo Brasileiro?
17 a 22 de outubro de 2016
Trabalho 6032
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Biotecnologia |
| Setor | Departamento de Biologia Geral |
| Bolsa | PROBIC/FAPEMIG |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | FAPEMIG |
| Primeiro autor | Kimberly Freitas Cardoso |
| Orientador | SILVIA ALMEIDA CARDOSO |
| Outros membros | Alessandra Teixeira de Paula, LEANDRO LICURSI DE OLIVEIRA |
| Título | Avaliação de uma nova estratégia vacinal contra Trypanosoma cruzi: DNA codificando o antígeno NTPDase-1. |
| Resumo | A doença de Chagas, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, pertence a um grupo de enfermidades consideradas negligenciadas. Apresenta tratamento medicamentoso ineficaz na fase crônica, com efeitos adversos consideráveis e, segundo a Organização Mundial da Saúde, a doença é responsável por 50.000 óbitos anuais no Brasil. No contexto de pesquisas alternativas para o combate à doença de Chagas, nosso grupo de pesquisa apontou a enzima NTPDase-1 de T. cruzi, já anteriormente apresentada como fator de virulência, como alvo para desenvolvimento de uma nova estratégia vacinal. O objetivo do presente estudo foi a avaliação e a padronização da vacina contra T. cruzi codificando o antígeno NTPDase-1. Para padronizar o crescimento bacteriano da cepa recombinante, a linhagem bacteriana transformada (pVAX/NTPDase-1) foi inicialmente avaliada quanto ao seu crescimento em meio líquido LB. Para isso uma alíquota da linhagem foi semeada em meio sólido LB ágar, expandida em meio LB líquido, alíquotas foram retiradas periodicamente para determinação da densidade óptica em 600nm e a cinética de crescimento foi determinada por aproximadamente 10 horas. Em seguida, bancos de células de referência (BCR) e de trabalho (BCT) foram construídos, onde uma colônia da bactéria transformada isolada em meio LB ágar foi expandida em meio LB líquido, centrifugada, a biomassa bacteriana foi ressuspendida em meio LB líquido contendo glicerol e armazenada em freezer -20ºC. Para otimizar as condições de cultivo, pré-inóculos foram expandidos em quatro condições de fermentação em batelada, variando agitação e temperatura. Por fim, foi realizada a purificação do DNA plasmidial (supercoiled), na qual a biomassa obtida por fermentação em meio LB foi submetida à lise alcalina e seu sobrenadante foi utilizado para a purificação. Foram realizadas três etapas cromatográficas, em sistema automatizado ÄKTA, utilizando as resinas Sepharose 6 Fast Flow, Plasmid Select e Source 30Q. Os plasmídeos purificados foram quantificados por espectrofotometria nos comprimentos de onda de 260 e 280 nm e, para caracterização final, uma alíquota foi submetida à análise eletroforética em gel de poliacrilamida e de agarose. Com 4 horas o crescimento bacteriano já estava na fase exponencial de crescimento e o tempo de 5 horas foi padronizado como tempo de crescimento de pré-inoculos nas fermentações posteriores. As condições ótimas de cultivo obtidas foram a temperatura de 37° C e a rotação 220 rpm que representam, respectivamente, a temperatura ótima de crescimento e a maior oxigenação do meio de cultivo. Ao final das três etapas de purificação cromatográfica, obteve-se um rendimento final de 1 mg de DNA plasmidial por litro de cultura e, pela caracterização eletroforética, percebeu-se que o plasmídeo vacinal estava livre de RNA e proteínas. Dessa forma, todos os objetivos propostos foram atingidos com sucesso e a padronização da produção vacinal foi um avanço significativo para o trabalho do grupo. |
| Palavras-chave | Trypanosoma cruzi, doença de Chagas, vacina de DNA. |
| Forma de apresentação..... | Painel |