Fome e Abundância: Um Paradoxo Brasileiro?
17 a 22 de outubro de 2016
Trabalho 6026
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Biotecnologia |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Raissa Barbosa de Castro |
| Orientador | JULIANA LOPES RANGEL FIETTO |
| Outros membros | Anna Cláudia Alves de Souza, GUSTAVO COSTA BRESSAN, MARCIA ROGERIA DE ALMEIDA LAMEGO, Yaro Luciolo dos Santos |
| Título | Comparação de dois métodos de purificação de um antígeno recombinante aplicável no diagnóstico de Leishmaniose Visceral Canina |
| Resumo | A leishmaniose visceral canina (LVC) é foco de diversos estudos devido à importância do cão como reservatório do parasito Leishmania. A eutanásia de animais soropositivos, orientada pelo diagnóstico imunoenzimático e por RIFI, tem sido uma das principais medidas de intervenção contra a disseminação da doença. No entanto, essas técnicas usam parasitos mortos fixados ou mistura de antígenos complexos, que resultam em importantes limitações de sensibilidade e especificidade. Neste contexto, torna-se importante o desenvolvimento e aprimoramento de novas tecnologias no diagnóstico da LVC. Assim, foi previamente publicado pelo nosso grupo de pesquisa a aplicabilidade de um novo antígeno recombinante de Leishmania infantum chagasi no diagnóstico da LVC. O objetivo do atual trabalho é aprimorar o uso deste antígeno no diagnóstico por ELISA. Para isto, foram analisados e comparados dois métodos para a purificação do antígeno, em sistema de cromatografia de afinidade manual (batch) e em sistema automatizado (FPLC). As amostras obtidas foram comparadas quanto ao grau de pureza e quanto ao rendimento do processo de produção. Para a purificação pelo sistema manual, utilizou-se 2 pellets referentes a 400 mL de meio de indução LB. No método automatizado foram usados 12 pellets, referentes a 400 mL do meio de indução. Para quantificar as proteínas purificadas e avaliar o grau de pureza das amostras, realizou-se eletroforese capilar e dosagem de proteína total pelo método de Bradford. Por batch, obteve-se um rendimento de 0,354 mg/L de indução. Já o processamento por FPLC rendeu 2,01 mg/L de indução. O ensaio de Bradford superestimou a concentração das amostras purificadas, possivelmente devido ao alto teor de aminoácidos básicos e aromáticos presentes no antígeno em questão. As purificações manuais forneceram amostras com maior grau de pureza (100%) e menos concentradas (141,6 ng/µL). As amostras obtidas por FPLC tiveram grau de pureza de 76,4% e concentração de 876,9 ng/µL. A fim de comparar o grau de pureza dos dois processos de purificação avaliados, a amostra resultante do método automatizado foi diluída, para que a sua concentração se igualasse à concentração da amostra obtida pela purificação manual. A amostra diluída obteve concentração de 98,4 ng/µL e 75,3% de pureza. Assim, a amostra purificada pelo FPLC demonstrou um grau de pureza menor que a resultante da purificação manual, ainda que ambas as amostras possuíssem concentrações próximas. Dessa forma, são necessários mais estudos sobre o processo de produção deste antígeno, visando o desenvolvimento de um método de produção que forneça alto grau de pureza e apresente alto rendimento, uma vez que estes parâmetros são fundamentais para o desenvolvimento de kits de diagnóstico. |
| Palavras-chave | Leishmaniose, Diagnóstico, Purificação de Proteínas. |
| Forma de apresentação..... | Painel |