Fome e Abundância: Um Paradoxo Brasileiro?
17 a 22 de outubro de 2016
Trabalho 5993
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Ensino |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Farmacologia e bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | Outros |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | UFV |
| Primeiro autor | Roberto Gomes Maia |
| Orientador | JOSE HUMBERTO DE QUEIROZ |
| Outros membros | Cleonice Aparecida Salgado, Gislaine Aparecida Purgato |
| Título | Bacillus subtilis//// |
| Resumo | Produção, purificação e caracterização bioquímica de uma amilase extracelular produzida por Bacillus subtilis ATCC 25858 Bacillus subtilis é uma bactéria gram-positiva, que tem sido usada em escala industrial devido a sua alta capacidade de produção enzimas extracelulares. Amilases são enzimas que catalisam a hidrólise do amido em produtos, como dextrinas, e pequenos polímeros compostos por unidades de glicose. As amilases possuem grande importância industrial.Neste estudo foi produzida, purificada e caracterizada uma amilase extracelular de B. subtilis ATCC 25858. Para produção da enzima foi usado como fonte de indução o amido solúvel 1% (m/v). Após 24 horas de incubação à 37 °C a cultura foi centrifugada obtendo-se no sobrenadante o extrato bruto contendo a amilase. O extrato bruto foi submetido a precipitações com de sulfato de amônio (60 e 80 % de saturação, sendo que a enzima de interesse ficou concentrada no precipitado com 80 % sendo ressuspendindo em tampão fosfato 1 M pH 7,5 e sequencialmente submetido a cromatografias de exclusão molecular (EM) . A partir da exclusão molecular foi possível recolher um pool contendo a amilase. Para averiguar a necessidade de posteriores etapas de purificação da amilase foi realizado um gel SDS-PAGE corado com nitrato de prata em que mostrou apenas uma banda de, aproximadamente 20 kDa referente à amilase. A amilase apresentou uma temperatura ótima igual a 37 °C e um pH ótimo igual a 7,0. Para o ensaio da termoestabilidade, na temperatura que foi considerada ótima para amilase (37 °C), a enzima demonstrou ser termoestável durante um tempo de 3 horas. Na temperatura de 60 °C a atividade enzimática decresce rapidamente mostrando que a amilase é instável a esta temperatura.Com 60 minutos de incubação, a atividade enzimática diminuiu 50% e com 150 minutos de incubação a enzima foi totalmente inativada. A eficiência catalítica da amilase foi inibida por Cu2+, Ni2+ e Zn2+ e foi pouco afetada por Mg2+ e Ca2+. A enzima não apresentou inibição na presença de EDTA. Para determinação das constantes cinéticas a enzima foi incubada com diferentes concentrações de amido. Os valores valores de Km e Vmáx foram respectivamente 0,403 g/L e 0,287 g/mim. Neste trabalho, foi possível obter a amilase a partir de B. subtilis ATCC 25858 com alto grau de purificação com apenas uma etapa de cromatografia de exclusão molecular, evidenciada pela formação de apenas uma banda na etapa de eletroforese por SDS-PAGE. Por não ser inibida na presença de EDTA a enzima mostra que não necessita de íons metálicos para sua atuação. |
| Palavras-chave | Amilase, Bacillus, Subtilis |
| Forma de apresentação..... | Painel |